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【求助】免疫共沉淀的分子量
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发表于: 2014-6-10 17:05 作者: dragonkilly 来源: 分析测试百科网
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【求助】免疫共沉淀的分子量
做免疫共沉淀时,沉淀下来的蛋白的分子量应该是多大,是两种相互作用蛋白的分子量之和吗?急!谢谢各位了!
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【求助】免疫共沉淀的分子量
我也来说两句
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最新回复
jujuba
(2014-6-10 17:05:38)
我觉得这要看你做完免疫沉淀后怎么处理了,如果你在A/G介质里加了SDS上样buffer煮沸的话,蛋白复合物应该已经解离了,跑胶看到的是单个的蛋白。
dragonkilly
(2014-6-10 17:05:58)
多谢指点,那我是否可以认为,如果在后面Western blot 中能够检测到一种蛋白,即两种蛋白存在相互作用呢?或者用什么方法处理免疫沉淀复合物可以让二者不解离呢?
jujuba
(2014-6-10 17:06:26)
不太明白,你是把一种蛋白(不是抗体)偶联到介质上,想做出它的相互作用蛋白吗?请详细说一下你的实验步骤。
dragonkilly
(2014-6-10 17:06:52)
我是检测两种已知蛋白间是否存在相互作用,首先用一种蛋白的抗体对核蛋白进行沉淀,如果二者间存在相互作用,那么另一种蛋白也会同时被沉淀下来,将免疫沉淀复合物用A/G收集,煮沸后,跑胶,转膜,并用另一种蛋白的抗体进行杂交。请多多指点!
dragonkilly
(2014-6-10 17:07:13)
煮沸后相互作用的蛋白能解离吗?
dragonkilly
(2014-6-10 17:07:43)
一般相互作用蛋白应该是不存在共价键结合的。所以SDS煮了后会解离
wmp1234
(2014-6-10 17:08:02)
我认为你的做法应该没有问题,既然已经解离了,那么检测到蛋白的分子量就是原来的分子量。
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我也来说两句
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【求助】免疫共沉淀的分子量
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jujuba (2014-6-10 17:05:38)
我觉得这要看你做完免疫沉淀后怎么处理了,如果你在A/G介质里加了SDS上样buffer煮沸的话,蛋白复合物应该已经解离了,跑胶看到的是单个的蛋白。
dragonkilly (2014-6-10 17:05:58)
多谢指点,那我是否可以认为,如果在后面Western blot 中能够检测到一种蛋白,即两种蛋白存在相互作用呢?或者用什么方法处理免疫沉淀复合物可以让二者不解离呢?
jujuba (2014-6-10 17:06:26)
不太明白,你是把一种蛋白(不是抗体)偶联到介质上,想做出它的相互作用蛋白吗?请详细说一下你的实验步骤。
dragonkilly (2014-6-10 17:06:52)
dragonkilly (2014-6-10 17:07:13)
煮沸后相互作用的蛋白能解离吗?
dragonkilly (2014-6-10 17:07:43)
一般相互作用蛋白应该是不存在共价键结合的。所以SDS煮了后会解离
wmp1234 (2014-6-10 17:08:02)
【求助】免疫共沉淀的分子量