【求助】蛋白质复性

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• hold住 (2014-6-12 09:59:54)

  
  缓冲液中含有1-2M的尿素可以抑制蛋白的凝聚，应该在这一浓度上时间长一点，让蛋白肽链充分折叠，然后缓慢的去除尿素，如果不想增大体系，最好梯度透析或用尿素剃度柱子减缓尿素浓度的变化，可以加一些有利于复性的物质，如甘油之类。
  或者可以试试流加法，把2M尿素的缓慢滴加到无尿素的缓冲液中，液体温度低一些，快速搅拌，要让前一滴充分稀释复性后再加下一滴，这样体系也不会太大。

• glass (2014-6-12 10:00:19)

  
  尿素梯度可以再做细一点，从2M继续按照一定梯度，分阶段透析。
  一般稀释复性和透析复性必然会增大样品体积，而且蛋白浓度越低，越不容易聚集，所以不用太在意是否会增大体积，复性结束后可以纯化并浓缩。
  柱上复性是个可以考虑的办法，一般变性条件下过凝胶柱或离子交换柱，然后梯度尿素流洗，可以复性一些蛋白，但容易造成蛋白沉淀堵住柱子，上样量不易太多。

• kulee (2014-6-12 10:11:01)

  
  可以考虑用层析柱来复性。用凝胶过滤方法可以慢慢置换缓冲体系，复性效果应该不错。另外可以考虑疏水柱上复性，通过逐步去除变性剂，蛋白正确折叠，当然不一定100％成功，但速度快而且消耗少，再者还可以浓缩加纯化。

• ROSE李 (2014-6-12 10:11:37)

  
  复性过程中一般添加谷胱苷肽。请问是添在透析袋里面，还是外面？
  谁能推荐一个自己实践中摸索得到的复性得很成功得复性液的组方？
  谢谢了。急等中。

• DDD (2014-6-12 10:12:26)

  
  我的谷胱苷肽是添在蛋白里了，10：1的比例
  目前也正在做包含体的复性，用的是稀释法然后再透析，还不知道怎样呢~~~

• DDD (2014-6-12 10:12:42)

  还原型/氧化型谷胱苷肽的比例是10：1