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【求助】关于SDS-PAGE
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我在做SDS-PAGE时,12%聚丙烯酰氨凝胶,150V 10min,再换180V 40min.跑胶时电流老是很小,只有10mA,而且条带横向扩散严重,开始时呈月牙形.向各位前辈请教.谢谢!
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字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-6-12 18:13 作者: 98776langtao 来源: 分析测试百科网
最新回复
jkobn (2014-6-12 18:13:24)
把你跑的胶贴出来看看 可以试试恒流跑
还有胶的质量也有影响 丙烯酰氨要过滤后 配胶
不知道开始你的电流正常否?你用的仪器是哪的?
如果是六一厂的垂直板 有时候有漏液的现象
如果负极漏液 低于两板间 就会电流下降
lxh031 (2014-6-12 18:13:46)
你看看你的操作是不是有问题,比如:封胶框拆了没有;内槽液面是否过胶;是否漏液等等细节的东西.
如果是药品的问题我想不会出这么明显的现象,你看一下你的分离胶是否压平,分离胶和浓缩胶是不是凝好了,不知道你的制胶的参数,建议不要加过多的
temed,混匀后凝的慢一点没有问题(15-30分钟)
再有就是你tris的ph值了,尽量校准一点,不然会影响你的跑胶质量!!
个人意见,仅供参考
good luck!
3648755 (2014-6-12 18:14:07)
胶的质量对电流的影响比较大,看看制胶过程有什么僻陋吧
ritou1985 (2014-6-12 18:14:27)
caihong (2014-6-12 18:14:48)
参考:
1,将样品尽量靠中间点样,其次在两侧空余样品孔点上loading buffer,减少边缘效应,可以避免两侧条带横向扩散
2,积层胶只跑了10min,可能是聚焦不完全导致的条带呈月牙形,可适当增加积层胶长度,改为恒流
98776langtao (2014-6-12 18:15:11)
谢谢各位的指点,不胜感激!
胶在跑的时候是月芽形的,但染色之后还可以,只是条带较宽.我想先看看制胶是不是有问题.我现在刚开始做,可能技术太差.
谢谢你们!!!!!
祝大家好运
fei1226com (2014-6-12 18:15:33)
人活一辈子战友:
首先检查一下的配胶试剂,如TRIS PH值、BCR-BIS最好在3月内使用,等有无问题;如无问题,你用那么高的电压,电流不应如低,你可在跑浓缩胶前,先预电泳20-30V 恒压 10-20 min,用来疏通胶孔,确保畅通,然后可80-100V 浓缩胶,120V 分离胶,先说这些吧。
nvdabing (2014-6-12 18:15:53)
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