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• PINK (2014-6-14 09:29:58)

  跑这么小的蛋白，应该有夹层胶的。另，你的浓缩胶和分离胶的比例似乎不对：浓缩胶和夹层胶（49.5％T，3％C），分离胶（49.5％T，6％C）。有信箱吗？发个配方给你，试剂配制比较麻烦

• 68943512yao (2014-6-14 09:30:21)

  QUOTE:

  原帖由 PINK 于 2014-6-14 09:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  跑这么小的蛋白，应该有夹层胶的。另，你的浓缩胶和分离胶的比例似乎不对：浓缩胶和夹层胶（49.5％T，3％C），分离胶（49.5％T，6％C）。有信箱吗？发个配方给你，试剂配制比较麻烦 ...

  我这个是终浓度啊。

• owanaka (2014-6-14 09:30:52)

  
  浓缩胶（T=4%,C=3%)分离胶（T=16.5,C=6%)表达不清楚,你指的是胶浓度吧.
  我跑1-5kd的,大家可以讨论一下.小分子要中间在加个夹成胶(spacer gel),还的低温跑.发个图上来看看,跟我跑的一样不,我也跑不好.

• 68943512yao (2014-6-14 09:31:19)

  浓缩胶（T=4%,C=3%)分离胶（T=16.5,C=6%)是指的胶终浓度,母液的浓度是
  49%.我的蛋白约８kd 左右.以前师姐有跑出来,但效果也不是太好.数码相机暂不能用,所以这几天没办法发图.反正就是胶条带很粗,另外向周围弥散.条带粗好象是上样量大了,我上了40微克.夹成胶是怎么回事?

• 68943512yao (2014-6-14 09:31:42)

  
  而且样品在浓缩胶中压不成一条线,到了分离胶中仍不行,整个条带在跑电泳过程中都很粗.但结果倒是在marker对应分子量的那个位置,但是条带太粗,无法确定具体分子量.

• 68943512yao (2014-6-14 09:32:04)

  我用的电压30v,但是压不到一条线,还能再低吗?今天恒流跑40ma(20ma/板)了一次,仍然是这种情况:条带非常粗,根本压不倒一条线.真是急死人了!

• owanaka (2014-6-14 09:32:40)

  
  我跑０．７５mm胶两快版也用４０mＡ，压的很好的．
  电压用７０v也可以压的很好，你的样品是不是加的太多了，样品加的量与扳的大小有关．

• 68943512yao (2014-6-14 09:33:03)

  的确是样品加多了，今天又作了一次，条带压出来了，跑出来条带看起来还不错。但在电泳过程中，条带进入浓缩胶后，在保持稳压的情况下，电流变大，由原来的30mA逐渐升为140mA,太恐怖了，不知是何原因？结果是样品没有走下来，在胶上半面部分。检查了一下，电极缓冲液、凝胶缓冲液都是新配的，没什么问题呀？好郁闷哦！

• owanaka (2014-6-14 09:33:24)

  在保持稳压的情况下，电流变大，由原来的30mA逐渐升为140mA,太恐怖了
  稳压的情况下，电流是越来越小的．稳流，电压是越来越大的．

• 68943512yao (2014-6-14 09:33:46)

  
  没错呀，当盐工进入分离胶后，由于胶 的浓度增大，应该是电阻越来越大，可是我的原因出在哪里呢？看来只好换个系统试一下了！
  当稳压以后，电流应该是由大变小的，我师兄稳压70V,电流竟如分离胶后由40mA变为10mA。