【求助】请教SDS-PAGE

最新回复

• fsdd817 (2014-6-14 15:38:09)

  
  蛋白量要保证,还有染色和脱色应该注意一下.10% 的应该可以.

• huifeng0516 (2014-6-14 15:38:32)

  
  会不会是蛋白样品的离子强度太大？如果是这方面的原因，可以透析或超滤除盐

• ukonptp (2014-6-14 15:38:49)

  
  如果以前很清晰的话，可能是染色液的问题。我跑70KD的蛋白也用10%，有一时间条带很不清晰，重配了染色液后条带重新清晰了，包括以前不清晰的样品。

• qhyu (2014-6-14 15:39:10)

  
  我的染色脱色液都是重新配过的，可是也不是很清晰，我现在打算重新来过，包括上样缓冲液都重新配置一次，看看会怎么样，要是还不行的话，我就真的没辙了～！

• windy+++ (2014-6-14 15:39:30)

  我觉得可能是样品的问题，没同时跑一个标准蛋白？你的样品可能有核酸在里边干扰。

• taoshengyijiu (2014-6-14 15:39:55)

  
  是不是有可能SDS的浓度过高了呢?
  意见仅供参考

• mimili_901 (2014-6-14 15:40:19)

  10%的胶应该能跑开的。关键看带型是否弥散，要是带型正常，只是颜色偏淡，建议重配loading buffer和脱色液，要是带型不正常，要从配胶方面找原因了

• qhyu (2014-6-14 15:40:41)

  
  谢谢大家的建议和意见，我在问一下，在脱色的时候，按照分子克隆第三版的方法操作的话，有什么利弊呢，如果染色液按照分子克隆上说的配制，那脱色液用甲醇：水：冰醋酸为5：4：1的配方怎么样？

• qhyu (2014-6-14 15:41:11)

  还有就是甲醇的比例与脱色效果有没有什么必然的联系呢，比如说在一定限度内，甲醇浓度越高脱色效果越好什么的？我不知道甲醇对脱色有什么作用，希望指点一点？～！

• pengke1983 (2014-6-14 15:41:29)

  
  看过一些介绍说甲醇和冰醋酸是固定用的，考染的时候亮蓝+甲醇+冰醋酸是染色与固定同时进行，至于甲醇在脱色时浓度的问题就难说了
  不过关于脱色可以给你个建议，用0.2M的NaCl溶液在55℃下脱色，又方便又没有污染