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【求助】上质谱前样品处理的疑问?
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发表于: 2014-6-21 17:50 作者: 喜乐lele 来源: 分析测试百科网
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【求助】上质谱前样品处理的疑问?
请教各位高手:
本人最近打算做质谱,但查的资料有出入:有的要求用DTT与IAA处理,有的则没用,我非常疑惑?有哪位高手能不吝赐教吗?万分感谢!
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【求助】上质谱前样品处理的疑问?
我也来说两句
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bring
(2014-6-21 17:50:16)
用DTT和IAA是2D分离蛋白的时候用的,质谱是做蛋白酶解后的肽段的分离和测序用的,通常是酶解后挥干NH4HCO3,再把肽溶解在10µl 0.1%TFA里,然后用ZipTip C18除盐,最后样品在溶解在25µl0.1%TFA里。
tangxin_80
(2014-6-21 17:50:35)
ZipTip C18除盐的过程有可能丢失亲水性比较强的肽段
喜乐lele
(2014-6-21 17:50:58)
本人还是不懂,我说的DTT与IAA处理,就是在蛋白点被切与脱色处理后的处理.请指教.
plaa
(2014-6-21 17:51:21)
DTT是还原剂,用它水化胶样是为了还原样品.之后碘乙酰胺,是烷化剂,是为了烷基化半胱氨酸残基,也为了进一步去除DTT的影响.
plaa
(2014-6-21 17:51:38)
我没有看过做maldy-tof不用DTT和IAA的.lz能把相关文章发给我吗?
pengke1983
(2014-6-21 17:52:04)
我们在做的时候加DTT是为了还原,打开双硫键,加IAA甲基化,然后LC/MS测定酶切后的肽段。
做不加DTT和IAA的,得到的肽段信息会有不同,综合两者信息,可以判断二硫键的情况。
偶也是刚刚做一点。
yes4
(2014-6-21 17:52:33)
楼主的问题,楼下的人回答没中的。
楼主问的是在酶解过程中是不是一定要做还原和烷基化。
做也可以,不做也可以。综合一起,为了节省时间,节省药品,减少在还原烷基化后重复的洗脱导致胶内蛋白的丢失,最好选择不做。Amylum兄说没见过,有机会来这里看看。
04906
(2014-6-21 17:52:55)
如果样品复杂,还是要做一下的好;如果样品相对较为简单,可能不做也可以,尤其是对那些水溶性好的蛋白质。
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bring (2014-6-21 17:50:16)
tangxin_80 (2014-6-21 17:50:35)
ZipTip C18除盐的过程有可能丢失亲水性比较强的肽段
喜乐lele (2014-6-21 17:50:58)
plaa (2014-6-21 17:51:21)
DTT是还原剂,用它水化胶样是为了还原样品.之后碘乙酰胺,是烷化剂,是为了烷基化半胱氨酸残基,也为了进一步去除DTT的影响.
plaa (2014-6-21 17:51:38)
pengke1983 (2014-6-21 17:52:04)
我们在做的时候加DTT是为了还原,打开双硫键,加IAA甲基化,然后LC/MS测定酶切后的肽段。
做不加DTT和IAA的,得到的肽段信息会有不同,综合两者信息,可以判断二硫键的情况。
偶也是刚刚做一点。
yes4 (2014-6-21 17:52:33)
楼主的问题,楼下的人回答没中的。
楼主问的是在酶解过程中是不是一定要做还原和烷基化。
做也可以,不做也可以。综合一起,为了节省时间,节省药品,减少在还原烷基化后重复的洗脱导致胶内蛋白的丢失,最好选择不做。Amylum兄说没见过,有机会来这里看看。
04906 (2014-6-21 17:52:55)
如果样品复杂,还是要做一下的好;如果样品相对较为简单,可能不做也可以,尤其是对那些水溶性好的蛋白质。
【求助】上质谱前样品处理的疑问?