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【求助】PVDF膜用前要用100%甲醇润湿吗
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发表于: 2014-6-27 11:08 作者: kulee 来源: 分析测试百科网
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【求助】PVDF膜用前要用100%甲醇润湿吗
刚定的PVDF膜不知道怎麽用,请大家指点指点!
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【求助】PVDF膜用前要用100%甲醇润湿吗
我也来说两句
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最新回复
qhyu
(2014-6-27 11:09:19)
同问,我一个以前专做wb的同学说先用甲醇泡一分钟,老板说直接泡电转液。
DONT
(2014-6-27 11:09:40)
泡30秒足够了。
fei1226com
(2014-6-27 11:10:26)
要用甲醇泡的,大概一分钟
glass
(2014-6-27 11:10:47)
用甲醇活化不能超过15秒,时间太久会对pvdf膜造成损伤。找一个平皿,倒入一定体积的纯甲醇,用镊子夹着膜边角在纯甲醇里漂一下,见到膜由不透明变为均一的半透明,大概需要5秒左右即可。然后立即向平皿中加入不含甲醇的转膜液,使甲醇的终浓度在20%,将凝胶和膜以及滤纸在其中平衡30min左右即可转膜,在整个过程中注意不要让膜干了,如果膜干了就需要重新活化。注意操作中不要划伤膜或者弄脏膜,否则显色后会出现痕迹,干扰结果判定。膜的孔径也是值得考虑的问题,普通大中分子量蛋白可选0.45um的就可以了,但对小分子量的多肽则需要0.22um的膜。尼龙膜和NC膜不需活化。可以参照随膜附带的使用说明操作,生产PVDF膜的公司如millipore网站上就有使用说明。还可见以下网站的说明:
cuturl('www.schleicher-schuell.com/bioscience')
祝好运!!
ero11
(2014-6-27 11:11:50)
活化过程
100%甲醇 1min,纯水 3min,然后浸泡于电转液中留做转膜既可
yjf1026
(2014-6-27 11:12:08)
必须用甲醇浸泡,以增加PVDF膜的亲水性,然后用ddH2O或者PBS浸洗,在放入transfer buffer或是封闭液中。
xyw5
(2014-6-27 11:12:29)
Millipore的蛋白质印记手册中推荐的步骤:
1、在甲醇中润湿膜15秒。膜应该均匀的由不透明变成半透明。
2、小心将膜放入 Milli-Q水中浸泡2分钟。
3、小心将膜放入转移缓冲液中平衡至少5分钟。
我最近也将作转膜,希望能和大家多交流经验。
DONT
(2014-6-27 11:12:47)
好象在甲醇中浸泡一下PVDF膜就可以了,时间1分钟左右,不用那么严格吧,然后放入转膜液中放几分钟即可,在这个过程中就可以对齐滤纸、膜和胶了,然后湿转或者半干转。
kuohao17
(2014-6-27 11:13:16)
Millipore的说明书上的步骤:
1、在甲醇中润湿膜15秒。膜应该均匀的由不透明变成半透明。
2、小心将膜放入 中浸泡2分钟。
3、小心将膜放入转移缓冲液中平衡至少5分钟。
老外很严谨,说得不会错
Milli-Q水可以用纯水代替
pvdf膜不亲水,如果不泡甲醇,转移液都无法浸湿,无法使用,而且使用过程中尽量不要使它干燥,否则什么都结合不上去,很可能影响结果
duoduo
(2014-6-27 11:13:34)
用无水乙醇也可以,15秒,去离子水洗10遍,转移buffer中平衡15分钟。
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【求助】PVDF膜用前要用100%甲醇润湿吗
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qhyu (2014-6-27 11:09:19)
同问,我一个以前专做wb的同学说先用甲醇泡一分钟,老板说直接泡电转液。
DONT (2014-6-27 11:09:40)
泡30秒足够了。
fei1226com (2014-6-27 11:10:26)
要用甲醇泡的,大概一分钟
glass (2014-6-27 11:10:47)
cuturl('www.schleicher-schuell.com/bioscience')
祝好运!!
ero11 (2014-6-27 11:11:50)
活化过程
100%甲醇 1min,纯水 3min,然后浸泡于电转液中留做转膜既可
yjf1026 (2014-6-27 11:12:08)
必须用甲醇浸泡,以增加PVDF膜的亲水性,然后用ddH2O或者PBS浸洗,在放入transfer buffer或是封闭液中。
xyw5 (2014-6-27 11:12:29)
1、在甲醇中润湿膜15秒。膜应该均匀的由不透明变成半透明。
2、小心将膜放入 Milli-Q水中浸泡2分钟。
3、小心将膜放入转移缓冲液中平衡至少5分钟。
我最近也将作转膜,希望能和大家多交流经验。
DONT (2014-6-27 11:12:47)
好象在甲醇中浸泡一下PVDF膜就可以了,时间1分钟左右,不用那么严格吧,然后放入转膜液中放几分钟即可,在这个过程中就可以对齐滤纸、膜和胶了,然后湿转或者半干转。
kuohao17 (2014-6-27 11:13:16)
Millipore的说明书上的步骤:
1、在甲醇中润湿膜15秒。膜应该均匀的由不透明变成半透明。
2、小心将膜放入 中浸泡2分钟。
3、小心将膜放入转移缓冲液中平衡至少5分钟。
老外很严谨,说得不会错
Milli-Q水可以用纯水代替
pvdf膜不亲水,如果不泡甲醇,转移液都无法浸湿,无法使用,而且使用过程中尽量不要使它干燥,否则什么都结合不上去,很可能影响结果
duoduo (2014-6-27 11:13:34)
【求助】PVDF膜用前要用100%甲醇润湿吗