【求助】如何快速灭活体系里的胰酶

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-6-28 09:10 作者: 锤子来源: 分析测试百科网

由于实验需要，蛋白酶解后的体系里需要迅速将胰酶灭活，但不希望影响酶解产生的肽段，不知什么方法好一些，将胰酶沉淀可以吗？
谢谢帮助！：）

bamboo16 (2014-6-28 09:11:10)

不知楼主所用的胰酶和细胞培养中所用的胰酶是否一致，如果一致，可加入Ca2+或小牛血清抑制其活性。也就是细胞培养中中和胰酶的办法。
49888 (2014-6-28 09:11:42)

沉淀不行，可以用蛋白酶抑制剂或者直接开水煮几分钟．
锤子 (2014-6-28 09:12:02)

不好意思，胰酶的说明书里为什么说Ca2+可以促进其活性？
gogo (2014-6-28 09:12:30)

看来楼主所说的胰酶和细胞培养所用胰酶不是同一种酶，细胞培养中所用的胰酶中加入EDTA效果更好，而后者是钙镁离子鳌合剂，看来这样不行了，没有太好的建议了。多谢提醒。楼主再想想别的办法吧。祝试验顺利
锤子 (2014-6-28 09:15:28)

我用的胰酶是蛋白质酶解用的胰酶，然后是做质谱鉴定的，但实验需要，必须将胰酶灭活。
感谢大家的帮助，有机会多交流！
xue258 (2014-6-28 09:15:46)

用10%的TFA和15%的乙腈，只要调整体系的pH就可以了。然后就可以做质谱鉴定。
祝实验愉快！