【求助】请问用凝血酶thrombin酶切gst蛋白的问题

最新回复

• XYZQ (2014-6-28 16:38:00)

  
  我们用Sigma的，纯度很高，就是贵一点

• newway (2014-6-28 16:38:28)

  QUOTE:

  原帖由 XYZQ 于 2014-6-28 16:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  我们用Sigma的，纯度很高，就是贵一点

  请问是限制级，有没有指明是用来做酶切的，价格大概多少啊，我买的那个纯度是77％，1000个单位300多，酶切也能比较彻底，就是有很多杂带

• eve_49 (2014-6-28 16:38:45)

  
  呵呵,楼主
  我告诉你吧,一般的酶效果就很好了,我买的1000单位70元的,酶切后目标蛋白中的杂带就很少了

• newway (2014-6-28 16:39:11)

  QUOTE:

  原帖由 eve_49 于 2014-6-28 16:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  呵呵,楼主
  我告诉你吧,一般的酶效果就很好了,我买的1000单位70元的,酶切后目标蛋白中的杂带就很少了

  你说的这个凝血酶在哪里买的呢？能否发pm给我
  另外，你说的酶切后目标蛋白少了，是指酶切前的杂蛋白在酶切后没有了吗？谢谢

• eve_49 (2014-6-28 16:39:39)

  对,纯度几乎就是99.99%

• eve_49 (2014-6-28 16:39:57)

  
  凝血酶是天津血液研究所的,非常杂,但量少,纯化后,在目标蛋白中就看不到了,目标蛋白可达99%,
  另外，你想问的GST蛋白的纯化遇到比较多的问题，我也是有很多问题,我看你都是中级战友了,还想多向你请教呢
  我的也是有杂带,但纯度都有在90%左右或者更高,别人说的,我还不知道怎么估计,不太相信软件
  我今天发现在pbs 里加1M氯化钠洗杂蛋白,gst蛋白不会被洗下来
  还有用0.002M的gsh就可以把gst蛋白洗下来了,节约了好多gsh呀,呵呵
  gst亲和胶用几次效果就差了,不知你有再生过嘛?

• gemei0115 (2014-6-28 16:40:22)

  
  我马上也要做GST酶切了。我认为还要把thrombin从目的蛋白中去掉啊（再过一次离子柱或分子筛）！另外，听一位老师说，目的蛋白还要在洗脱液（PBS等）中保持可溶，否则没有活性啊！
  请各位讨论、给高见啊！