【求助】做不出结果

最新回复

• wanglaoshi (2014-6-28 17:12:46)

  
  是不是跑过了啊？

• nn255 (2014-6-28 17:13:03)

  
  你配置的SDS胶浓度是多少啊，有可能跑过了都不知道

• dreaming (2014-6-28 17:13:28)

  
  10%的胶,按照那条件 应该是跑不出去的啊 我今天又做了下 ,时间减少了半个小时,不知道会是什么结果 mark今天跑的很漂亮 比以前的好的多 但是今天是我最后一批蛋白了 我现在没细胞了 也就根本没蛋白 ,我的赌注全部在上面了 做出来 了 研究生还有的读 做不出来 我真的要退学了

• hulu呼噜 (2014-6-28 17:13:46)

  
  电转什么条件多长时间，转完膜之后用丽春红染一下膜看看有没有蛋白条带，胶也然一下，在考虑是否继续，细胞裂解的量是多少

• dreaming (2014-6-28 17:14:05)

  
  我转膜转的不错 立春红染色也很好看 , 一抗2小时,2抗2小时,但是一显影 却尽是杂带 ,目的条带也有,但杂带的颜色比目的条带还深, 值得说下的是,我做的是兔的细胞,我用的抗体却是兔抗老鼠的, 大家快说说 这究竟是什么回事情,一抗我很怀疑有问题的,但是我老板却认为国外有人发表了文献 用了这个抗体做了兔子,他就认定了 我也一定能做出来 ,

• kent (2014-6-28 17:14:23)

  
  实验过程说的不是很详细，
  涉及到以下几个问题：
  1、蛋白上样量是多少，不能太多（我个人觉得你的上样量可能太大了）
  2、封闭，个人觉得要时间长一点，我是过夜的。
  3、一抗，稀释多少倍。浓度不能太高，否则就会有很多杂带。
  4、一抗孵育后、以及加完二抗，一定要多洗几次。

• BOSS2011 (2014-6-28 17:14:42)

  
  我一抗和你一样，但没有孵育那么长时间一个半而已

• dreaming (2014-6-28 17:15:04)

  我上样量是15微升,封闭可能是短了点 是2 小时, 我下次尝试过夜
  昭昭wang 美女同志....谢谢你对我的关心.,我想知道你用的是什么抗体 ,做的是什么细胞 ,我现在的抗体被我拿来当兔抗兔使用, 我的一抗的说明书上可没写对 兔子的有用,是指明了对鼠和人有特异性!! 我赋予一个半小时也搞过 效果差不多!!!诶 希望你再给我点意见吧

• BOSS2011 (2014-6-28 17:15:23)

  
  哦，大家共勉吧，我不太记得是抗什么的了，我做的是连接蛋白43，兔来源的吧，二抗山羊抗兔，我觉得你目的条带出来了就ok吧，我作也有杂带啊。我封闭也是四度过夜，我觉得也是你封闭的不好。加油，我也只做出来一个抗体，也不好毕业啊。

• ffaa (2014-6-28 17:15:40)

  
  2抗孵育时间过长,1H足以

• dreaming (2014-6-28 17:16:44)

  你做的是什么动物的细胞 ?兔子 老鼠 还是人的 ?我做的是兔子的基地动脉的 Cx43 我用的抗体是zymed的兔抗鼠的抗体 ,,你能给我点你的经验么 ?包括电泳 ,转膜,封闭.一抗二抗的时间 谢谢你了