【求助】硫酸氨沉淀的蛋白直接跑SDS-PAGE有什么影响

最新回复

• glass (2014-6-30 17:35:29)

  高浓度盐的存在会导致蛋白质样品电泳速度降低，拖后腿。
  不过我认为，盐析出来的蛋白质溶于缓冲液后，硫酸铵浓度不算太高，对蛋白质电泳影响不大，能够根据分子大小分开的，不用担心。我用疏水柱层析后的洗脱液一直就是直接用来做SDS-PAGE的。
  不过，楼主如果担心电泳不够美观，可以超滤除盐，或者透析，或者用分子筛凝胶除盐。后两者或会一定程度降低蛋白质样品浓度。

• 阿k (2014-6-30 17:35:52)

  硫酸氨沉淀直接跑SDS-PAGE的话，有什么方面要改进，是不是要降低电压，增加时间呢？

• remenb (2014-6-30 17:36:12)

  
  如果缓冲液中含硫酸铵的话，要跑电泳也行，只是电压要降低，而且不同样品间最好能空隔一孔，避免样品间离子浓度不同而影响电泳的分离形为。

• zhenxin (2014-6-30 17:36:37)

  各位做的结果与我的不同. 我做电泳是, 无论是硫酸铵沉淀的样品, 还是疏水柱洗下的样品, 都不正常. 不但该样品本身不正常, 还会殃及邻近的几个孔.

• lixi559 (2014-6-30 17:37:07)

  
  楼主跑出来的带是不是拖带严重，带形不规则，这是我用硫酸铵沉淀后跑胶遇到的现象。

• qqq111 (2014-6-30 17:37:32)

  
  将沉淀后的蛋白和超虑浓缩后的一起分开一点上样对比一下， 再看看结果如何！

• panda王 (2014-6-30 17:38:00)

  
  这个我也尝试过,效果不好,最后还是脱盐以后再跑的.

• H2O (2014-6-30 17:38:22)

  我都是直接上样的，但是一定不能隔孔上，连续上样，没问题的