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【求助】凋亡指标BAX， BCL的WB条件

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-6-30 17:41    作者: wawa    来源: 分析测试百科网

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【求助】凋亡指标BAX， BCL的WB条件

最近在做凋亡指标，总是做不出来，抗体都是买的知名公司产品，文献上都有报道过的，不知道是否有高手做过这方面的实验，指点一下
15%的胶，90v转膜2个小时，丽春红染色条带很清晰，转膜是没问题的，但最后结果就是不理想，背景很脏，杂带较多，不知道怎么办了
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  • nn255 (2014-6-30 17:42:19)


    你用奶粉去背景了吗！
    建议你作如下改动，如果你没有用奶粉去背景，那么就用奶粉去背景，并在四度过夜，这样以后基本上就不会有背景。
    如果你已经用了上面的方法，你可以考虑改变一抗，二抗的浓度及反应时间！

  • wawa (2014-6-30 17:42:36)

    谢谢，我用了奶粉，不过是室温1小时，我试一试你的方法

  • mimili_901 (2014-6-30 17:42:55)

    我做过BAX 的WB，用的是中山分装的，结果还可以，我的WB 结果都是转膜后5％奶粉封闭2小时后，1％BSA稀释抗体（因为这样可以回收抗体下次再用）4度过夜，5％奶粉洗三次15min,二抗1小时，PBS T或TBST洗三次15min后曝光

  • wawa (2014-6-30 17:43:15)


    谢谢，请问楼上的一抗后是用奶粉洗吗，一般不是都用TBST洗吗，还是再重新封闭一下

  • mimili_901 (2014-6-30 17:43:39)


    一抗后是用奶粉洗,5％奶粉洗三次,每次15min,二抗1小时，PBS T或TBST洗三次每次15min后曝光，我一直都是这样做的，不管是什么抗体，结果每问题

  • cwcwcww (2014-6-30 17:44:08)

    这两个我以前都做过啊,没有什么特别啊,和普通的WB一样的,用的抗体是SANTA CRUZ的

  • windboy (2014-6-30 17:44:32)


    BAX 和BCL2做WB结果很一般。不过想要阳性的结果的话，也可以凑合着用。实验结果重在分析嘛，哈哈。
    不过假如我是老板的话，我是不会让我的学生做这两个蛋白的WB的。浪费钱不说，结果还不可信。
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