【求助】为什么我的SDS-PAGE电泳要将近20小时

最新回复

• c86v (2014-7-04 10:31:00)

  
  我做的一般都是5~6小时,最多8小时,但那是电压很低才会那么久啊,也没有20个小时这么长啊!根据你讲的情况,你先检查一下电极是否合适,有没有接触不良;其次,电泳槽的电泳缓冲液液面有升高,这种情况不会是有冰水进入到电泳槽了吧?改变了缓冲液的离子浓度,这个也可能影响电泳速度的.

• zsxan1990 (2014-7-04 10:38:06)

  
  我觉得你的running buffer出问题了，是不是用的次数太多，还是稀释的浓度不对，反正，强烈建议你换buffer。80V电流一般要40mA左右。要不就是你的电泳槽漏水，上下槽电流不是很通。

• nut6694 (2014-7-04 10:38:30)

  
  你不会没有去掉封胶的橡胶条吧？！

• bring (2014-7-04 10:38:51)

  
  "电泳槽从冰上拿出来时,发觉电泳槽的电极缓冲液面不断升高,电流由原来的10几上升到70多."--那就要问一下你了,你早冰浴电泳的时候,有没有观察过你的电极缓冲液是否已经没过了凝胶的界面了.也就是说在开始的时候你观察缓冲液已经过了界面了,可是当你放入冰浴后,由于受冷了收缩,液面下降厉害,使液面和凝胶有接触,可保持一定的电流通过,但是却不能维持恒定的高电压,拿出来后,液面恢复正常就可以了.所以建议你注意一下了.

• jujuba (2014-7-04 10:39:10)

  
  觉得很有可能是running buffer得问题,你有没有看跑的时候电流是多大啊?

• fsdd817 (2014-7-04 10:39:32)

  出现这种情况要考虑几个方面，一是凝胶的配制，可能其中有成分发生了变化，建议重新配凝胶（包括各种组成液如Tris HCl等）；二是电流Buff可有有问题，要重配试一下；三是电泳 过程中出了问题，建议电泳时密切观察，应该可以发现问题。其实SDS-PAGE关键是液体的问题，有一个地方出了问题，可能就有意想不到的结果。
  祝你好运！

• xiaoxiaoniao (2014-7-04 10:40:01)

  我做的一般都是5~6小时,最多8小时,但那是电压很低才会那么久啊,也没有20个小时这么长啊!根据你讲的情况,你先检查一下电极是否合适,有没有接触不良;其次,电泳槽的电泳缓冲液液面有升高,这种情况不会是有冰水进入到电泳槽了吧?改变了缓冲液的离子浓度,这个也可能影响电泳速度的.
  
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  谢谢的你回复>>>>>>>>
  电极怎么才算接触不良?在加冰的过程中是有冰块进入缓冲液,但不多,我觉得应该影响不大.

• xiaoxiaoniao (2014-7-04 10:40:19)

  我觉得你的running buffer出问题了，是不是用的次数太多，还是稀释的浓度不对，反正，强烈建议你换buffer。80V电流一般要40mA左右。要不就是你的电泳槽漏水，上下槽电流不是很通。
  
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  同样感谢你的回复.
  我正极的缓冲液是用过一次,但在这次用之前我用PH计测其值,没发现变化,况且我负极那边的电极缓冲液是新配的;我80V的电流只有十多;在电泳是我发现正极的缓冲液有渗漏.

• xiaoxiaoniao (2014-7-04 10:40:42)

  你不会没有去掉封胶的橡胶条吧？！
  
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  同样感谢你回复.
  但我不知道什么是封胶的橡皮条,好象没这东西!

• xiaoxiaoniao (2014-7-04 10:40:58)

  "电泳槽从冰上拿出来时,发觉电泳槽的电极缓冲液面不断升高,电流由原来的10几上升到70多."--那就要问一下你了,你早冰浴电泳的时候,有没有观察过你的电极缓冲液是否已经没过了凝胶的界面了.也就是说在开始的时候你观察缓冲液已经过了界面了,可是当你放入冰浴后,由于受冷了收缩,液面下降厉害,使液面和凝胶有接触,可保持一定的电流通过,但是却不能维持恒定的高电压,拿出来后,液面恢复正常就可以了.所以建议你注意一下了.
  
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  刚冰浴时,液面没过凝胶的界面;再有拿出来是液体是漫过电泳槽的.

• xiaoxiaoniao (2014-7-04 10:41:24)

  出现这种情况要考虑几个方面，一是凝胶的配制，可能其中有成分发生了变化，建议重新配凝胶（包括各种组成液如Tris HCl等）；二是电流Buff可有有问题，要重配试一下；三是电泳 过程中出了问题，建议电泳时密切观察，应该可以发现问题。其实SDS-PAGE关键是液体的问题，有一个地方出了问题，可能就有意想不到的结果。
  祝你好运！
  
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  感谢你的回复
  这些我一定注意的.另外电压波动正常吗?

• BOSS2011 (2014-7-04 10:42:02)

  电极怎么才算接触不良?在加冰的过程中是有冰块进入缓冲液,但不多,我觉得应该影响不大.
  
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  检查电极是否接触良好,你可以在接通电源以后看电泳槽两极的两个导线上是否出现大量气泡;一般在接通电源以后电泳槽导线处会出现密集的气泡升起,如果气泡很少或根本看不到,那就是接触不良了;另外楼上战友的建议也有可能;总之你要在电泳时注意观察电压,电流的情况

• fei1226com (2014-7-04 10:42:19)

  
  封胶的橡皮条,呵呵,人家可能用的是bio-rad嘛.