【求助】过CM阳离子柱后，SDS—PAGE的总条带为什么...

最新回复

• 8s5g (2014-7-05 16:30:48)

  
  补充：上面电泳图左一泳道为上样的天然蛋白，2泳道为过CM柱分离到的第7组分，3和4泳道为第6组分的不同收集管。5－8为过CM柱分离到的第5－第2组分，第9泳道为marker，10泳道为第1组分。其中1、2组分为流穿峰。
  该电泳图2－10泳道样品未经浓缩。其他经浓缩后的电泳图也与此差不多，但上部有时多两条带。总之比原样品条带少了。
  另外，我感觉分离的效果也不是太好，该如何提高分辨率？
  还想请教着色深的两条带会不会是糖蛋白？怎么从电泳图上初步判断那个蛋白是否是糖蛋白？

• 8s5g (2014-7-05 16:31:32)

  再附上一张浓缩后的组分电泳图。marker前后是两次的CM组分浓缩液，从5－1，和从4－1。过CM柱后有时组分多有时少1－2条，也请高人指点。

  
  13773341.jpg

• 8s5g (2014-7-05 16:31:51)

  
  我分离的是一种未知蛋白，检测到活性的是分离后电泳条带最多的组分，该如何继续分离？
  marker： 116 67 45 35 25 18 14

• plaa (2014-7-05 16:32:07)

  很正常,因为纯化后不少组分被稀释或者没有被收集,所以电泳跑不出来,看不到,自然就少了.

• 66+77 (2014-7-05 16:32:29)

  
  问题是我几乎收集了UV检测到的所有峰,请chromatography先生再给点高见.也回答一下前面提到的其他问题.

• 3648755 (2014-7-05 16:32:46)

  应该是因为有些浓度不一样了，染色灵敏度不够。

• 8s5g (2014-7-05 16:33:30)

  感谢各位热情的回复！
  有谁能回答一下前面提到的其他问题.
  检测到活性的是分离后电泳条带最多的组分，该如何继续分离？
  另外，我感觉分离的效果也不是太好，该如何提高分辨率？
  还想请教着色深的两条带会不会是糖蛋白？怎么从电泳图上初步判断那个蛋白是否是糖蛋白？