【求助】请教Western 的高手,关于460KD的蛋白

最新回复

• ROSE李 (2014-7-05 17:09:54)

  你的问题跟western有什么关系？先用考染确定点用没问题！

• 49888 (2014-7-05 17:10:27)

  你把分离胶配成10%的试一下

• u234 (2014-7-05 17:10:53)

  
  我估计是分离胶的浓度太低了，目的条带后来跑得太散，浓度不够，所以显示不出来。你可以这样：
  1.先试一试8%的分离胶
  2.跑大的密度梯度分离胶可能也会有收获。

• wmp1234 (2014-7-05 17:11:10)

  
  我估计是分离胶的浓度太低了，目的条带后来跑得太散，浓度不够，所以显示不出来。你可以这样：
  1.先试一试8%的分离胶
  2.跑大的密度梯度分离胶可能也会有收获。

• pengke1983 (2014-7-05 17:11:28)

  分离胶和积层胶都用６％或７％的胶尝试一下．

• windy+++ (2014-7-05 17:12:00)

  
  为什么用6％，7％或8％的分离胶，分子克隆上不是说，5％的分离胶范围是57KD－212KD，如果胶的浓度再大一些，是不是分离的分子量更小呢？如果用，460KD的蛋白能不能跑下来呢？那电泳需要什么条件、时间？电压？请教各位高手有没有跑过大于400KD的蛋白，尽情指点！实在不知怎么办

• 分子式 (2014-7-05 17:12:29)

  400KD是整个蛋白分子的分子量吗？应该是由多个亚基构成的吧，跑胶要依据亚基的分子量吧

• PINK (2014-7-05 17:12:48)

  
  请跑过大分子蛋白的高手多多给予指点，我的实验也碰到相似的问题。

• ffaa (2014-7-05 17:13:16)

  我有个蛋白等电点为3.9，分子量约为9kda
  用普通的Tricine sds page行吗？
  不知道这个等电点会不会有影响。

• ffaa (2014-7-05 17:13:40)

  
  用8%的胶跑一下.不行在试10%的

• DDD (2014-7-05 17:13:55)

  
  For Western Blot, you'd better check out that the problem is from RUNNING a gel or WESTERN process.
  Suggestion:
  1. Comassie staining to check if your target protein is really on the gel, and in the correct molecular weight;
  2. Set up a positive control to make sure your Western Blot trans-membrane condition really works.

• junjie05 (2014-7-05 17:14:11)

  
  我最大做过200KD的蛋白，给你几点建议，希望对你有所帮助：
  1.没有蛋白一个可能是跑的时间太长，胶太稀，蛋白跑丢了，另一个可能就是蛋白分子量太大根本就没有跑下来。前一种情况可以通过MARKER来确定，后一种情况可以通过考马斯亮蓝染胶来确定。
  2.如果是后一种情况可能只有通过配更低浓度的分离胶来解决了，或者做梯度电泳。
  3.5%的胶并不容易碎，注意操作

• INK (2014-7-05 17:14:44)

  
  你可用琼脂糖跑一下试一试,一般这么大的分子量在PAGE上很难跑下来.我开始也跑过,现在也改了,觉得还行.

• XYZQ (2014-7-05 17:15:24)

  用琼脂糖跑大分子量蛋白,怎么操作呢?多大比例的胶?电泳时间怎么确定?电转时和做PAGE一样吗?western blot 不是都用PAGE电泳吗?请指点一下.最近做大分子量蛋白,苦恼啊.希望有经验的朋友给予帮助.多谢!

• greenbee (2014-7-05 17:16:23)

  我有个问题，我得目的蛋白是41KD，我用预染marker作为参照，marker条带是20，26，36，48，85，118KD，以前不用预染marker的时候，根据溴酚兰条带判断跑胶时间，一般在120min左右，但是自从用预染marker之后，主要参考marker条带得位置，起码得跑180min左右，并且相对marker来说目的条带只是在胶中间位置，分离胶浓度为12％，
  请问如果这样长（甚至可以更长）时间跑胶的话，会不会有什么影响呢？有没有战友碰到过这种情况呢？很是疑惑!