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【求助】SDS-PAGE遇到的问题

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-7-05 22:24    作者: tewank    来源: 分析测试百科网

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【求助】SDS-PAGE遇到的问题

各位大侠，
小妹在跑胶的过程中，发现溴芬兰已经跑到了胶的底部，染色脱色后却发现蛋白条带只跑到分离胶的一半，蛋白全集中分离胶的上半部，而下半部却什么都没有，这是什么原因造成的啊？
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  • yyaxw84 (2014-7-05 22:24:43)

    我个人认为是您的制样的问题了,一般来说小型的电泳槽没一个点样孔的上样量为20 to 40 micrograms/well.过多的话会不利于蛋白的泳动,造成凝胶的超负荷电泳.
    此外,不知道您的各种溶液的PH值调好没有啊!

  • tewank (2014-7-05 22:25:05)


    谢谢！不过我的上样量是10ug/孔，应该不会过量，我取复合一下溶液的pH值吧。

  • qqshepherd (2014-7-05 22:25:51)


    你的分离胶浓度过高了

  • ffooll (2014-7-05 22:26:54)

    偶做的也是，后来老板告诉偶就待溴酚蓝跑出后再多跑一段时间，这个时间长短自己估计，另外分离胶长度可以相对高些，而浓缩胶不要太长，忘有所帮助。

  • nn255 (2014-7-05 22:27:13)


    我个人认为 是你的样品的问题，我觉得是不是你的loading buffer 在准备的时候，里边的SDS 没有充分的溶解，你在制备loading buffer的时候 也许是 直接将SDS 粉末加到液体里边，这样肯定不会充分的混匀的。个人觉得 往你的样品中加点 SDS 然后 从新煮沸 ，看看结果怎么样！

  • hulu呼噜 (2014-7-05 22:27:56)


    有两种原因：一是分离胶的问题，胶的凝固不好，不利于电场的泳动或胶的浓度过大，导致溴芬蓝指示与蛋白泳动不匹配；二是电泳缓冲液的问题，是不是用的时间过长，pH不对等。

  • daod (2014-7-05 22:28:57)


    我出现过这样的问题，以前跑的挺好，改进后恢复正常．
    １.电泳缓冲液的问题，用的次数过多，缓冲能力下降，尽管有人说缓冲液可用5-6次，可我觉得还是在４次以内为好．
    ２.严格配置分离胶，做的多了有时就不太仔细，认为反正浓度小点也没问题，可是会是整个体系混乱，特别是ＰＨ．
    ３.浓缩胶要适合长度，我出问题的时候是浓缩胶过短．
    主要的问题在胶的制备，当然样品准备也应按要求来．

  • greenbee (2014-7-05 22:29:25)


    个人认为楼主的情况可能是样品没有裂解充分

  • gogo (2014-7-05 22:30:27)


    我个人也认为有两个原因：
    1.分离胶浓度过高，样品分子比较大，走不下来；
    2.分离胶的长度问题

  • tewank (2014-7-05 22:32:42)


    偶也觉得主要是胶的浓度和跑的蛋白质的分子量问题，以前跑DNA也出现过这种现象。胶的浓度降低后问题就好多了，可以试试。
    指示剂和样品的距离有时候就是比较大，主要取决于样品的分子量的。
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