【求助】如何简单方便地测定蛋白质含量,急!

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-7-07 16:28 作者: jujuba 来源: 分析测试百科网

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【求助】如何简单方便地测定蛋白质含量,急!

我用分光光度计测组织匀浆的蛋白含量,可是好象我们实验室分光光度计太敏感了,每次的读数相差都很大,真是把我搞晕了

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wmp1234 (2014-7-07 16:29:08)

我们试验室一般都是测细胞总蛋白,也是用分光光度计,读数较稳定,标曲相关系数>99.5%,ACtin均一,你考虑下是否是你的测蛋白的试剂盒不好?你的标曲怎么样?
zhenxin (2014-7-07 16:29:25)

你用的是什么方法，考马斯亮蓝法吗？该法试剂不佳时结果很糟，比色杯黏附染液。
jujuba (2014-7-07 16:29:45)

我没有用试剂盒,我用的是紫外分光测定法,
A1%1cm＝13.8（IgG）(280nm)
A1%1cm＝14.5(IgM)(280nm)
蛋白质浓度（mg/ml）=1.45OD280－0.74OD260
nvdabing (2014-7-07 16:30:08)

你的测量是不是超出量程了啊？？
用OD260-280测量，测量值在0.5~2.5左右为正常范围（我用 beckman du 530)
你的机器量程是多少？？最好稀释再测量。
mamamiya (2014-7-07 16:30:25)

紫外分光机测前预热1小时。
这是最简单的方法。
结果会稳定些。
jujuba (2014-7-07 16:30:46)

谢谢，我的血清蛋白定量大约在20左右，我再测一下试试吧
glass (2014-7-07 16:31:03)

这里是cells 战友提供的各种方法的优缺点，您可以根据需要进行选择
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=747153&sty=3&keywords=%B5%B0%B0%D7%D6%CA%B6%A8%C1%BF')
以上方法我都有收集，如有需要请留言Smile
xyw5 (2014-7-07 16:31:25)

你可以试试用BCA试剂盒
moonlight45 (2014-7-07 16:31:48)

用考马斯亮蓝最好，最准了。可以买带标准含量蛋白的，不用做曲线，只要把你的目的蛋白稀释到跟标准蛋白大致的含量（1g/L左右）即可根据公式：目的蛋白浓度=目的蛋白的OD值/标准蛋白OD值*标准蛋白的浓度求出。