【求助】SDS蛋白质电泳条带为什么老是歪啊?

最新回复

• zhenxin (2014-7-07 17:25:24)

  
  条带的歪斜和上样量有一定关系，各个泳道上样量不一致可能导致条带的歪斜。再就是看看你的电泳缓冲液是否时间长了，一般电泳缓冲液用3~5次就要换新的。
  凝胶的配置要注意pH值和混合均匀，如果胶不均匀，也会影响条带。
  从你后面的描述中，感觉你的电泳缓冲液可能有问题（缓冲能力不够）。跑胶的时间太长了，我一般跑胶2~2.5小时。查查电泳缓冲液的pH值。

• rxcc33 (2014-7-07 17:25:45)

  
  谢谢！电泳缓冲液用的时间确实比较长，可是跑胶的时候从电流表上看电压在120v时候，电流大概在60mA左右，不知道这个数值正常不正常？

• yueban-1147 (2014-7-07 17:26:06)

  
  个人愚见：
  恒流跑比较合理。

• NBA (2014-7-07 17:26:26)

  一点点分析及建议：
  1.首先我认为胶跑歪的主要原因还是胶的问题：可能你在灌胶前没有混匀；你在灌胶的时候有漏胶现象，即使不漏胶，最边缘的两个泳道往往也可能会跑歪；还有就是温度的问题使你的胶凝的不匀。
  2.个人认为上样量大可能会有此现象，但是主要导致的还是样品扩散或托尾。
  3.你的电泳时间是有点长，这样会导致泳带变宽，甚至扩散。适当的调整电压或电流，缩短电泳时间。
  4.bio-rad mini 小胶一般1h，六一的大胶为3h左右。

• ladyhuahua (2014-7-07 17:26:45)

  
  对，我觉得如果两边有漏胶的情况的话，往往就会跑歪．　

• memory (2014-7-07 17:27:32)

  
  Lanes become distorted if the samples sit in the wells for too long before running.

• yysr238 (2014-7-07 17:27:47)

  
  以前我也用sds－page胶来跑，条带也是歪歪斜斜，经过多次改进总是得不到非常好的条带，向实验室的其他师兄咨询后也有同样问题，后来改用tricine胶后，上述情况就没了，而且条带很直，dolphine可以跑一块tricine胶来看看（我的蛋白分子量42kd）。祝好运！

• bring (2014-7-07 17:31:12)

  
  条带歪的原因及改进
  1 可能是你的样品含盐等杂质，需要去除
  2 你的胶配的或凝得不均匀
  3 你得电泳缓冲液可能配错（我们试验室有人曾出现过）或用太多次离子浓度已经变了
  4对胶两边两个泳道，条带歪很常见，我们通常不用这两个并且电泳时只加入一些上样缓冲液（溴酚蓝），可以防止更内侧的条带跑歪。
  希望有用！