【求助】请问分子量170的胶浓度

最新回复

• nut6694 (2014-7-07 17:57:34)

  
  你这个170的分子量分离胶应该用15%的,浓缩胶没问题.

• DNA (2014-7-07 17:57:54)

  
  12%就可以,5%的浓缩胶. 我跑电泳170KD的Marker很清楚.再不行可以延长电泳时间.

• DONT (2014-7-07 17:58:10)

  
  多谢各位了，有一疑问不是说分子量大的蛋白，应该用浓度小的分离胶吗，这样地话，它才可以跑的快吗

• zsxan1990 (2014-7-07 17:58:26)

  
  现在一般都跑还原或非还原SDS-PAGE，170kd的蛋白要看你的蛋白的亚基的分子大小了，如果你的亚基分子量不高于50Kd，15％的分离胶完全没有问题，只要你的电压和时间掌握好。如果你的亚基分子量于50Kd，你的分离胶用10％没有问题，由于你的蛋白分子量为170Kd，所以你的亚基也不可能太大。当然浓缩胶用5％的就行。

• mamamiya (2014-7-07 17:58:49)

  楼上地说得很对，应该看亚基的大小和组成，CV 100V 2-3hours
  顺便请教，还原和非还原的在实验设计上有什么区别，结果上呢？

• zsxan1990 (2014-7-07 18:00:48)

  要根据自己的跑电泳目的采用还原或非还原系统：
  1.一般非还原SDS-PAGE就是在样品处理液中不含有巯基乙醇等降解二硫键的还原性物质。一般应用于看样品中是否含有二聚体或多聚体，可以从电泳扫描后分析纯度、分子量等。
  2.还原的显而易见样品处理液中含有还原性物质，一般用于看菌体目的表达、包含体含有目的蛋白量、诱导后鉴定菌种等

• TAT (2014-7-07 18:01:10)

  蛋白质技术手册上不是说170kd的适合用5％的分离胶么？

• zsxan1990 (2014-7-07 18:01:27)

  
  蛋白质技术手册上说170kd的适合用5％的分离胶，的确，但是SDS-PAGE走的是亚基的分子量，蛋白大部分是通过氢键的相互作用而形成其高级结构的，一般是由几个亚基折叠而成的，而SDS的存在可以破坏氢键，使高级构象被打成亚基的形式分子量就小了，该方法测定的是蛋白质的相对分子量，如果你的蛋白就是一种亚基，那电泳后应该就是一条带，象我的一个蛋白是200万的抗原，有三种亚基，电泳结果为3条带。蛋白质手册上的方法应该是测定蛋白的绝对分子量的，跑的是天然电泳，系统中没有使蛋白质变性的试剂和步骤。

• DONT (2014-7-07 18:01:44)

  
  多谢各位，还有一个问题，我在用10％的胶跑的时候，170带出现模糊一片，请问是什么原因呀

• uaubc (2014-7-07 18:02:00)

  
  用10％的胶跑的时候170带出现模糊一片，是不是由于您的蛋白浓度太高了，稀释10倍左右试试。另外这个蛋白是您表达的或是从天然提取的，能告诉以下吗？

• zsxan1990 (2014-7-07 18:02:18)

  
  发生一片模糊，最好把图贴上来：（简单分析几种原因）
  1.正如你说你的上样量太大了，一般厚胶10微克兰染、5微克银染足够了。
  2.你的样品上样量大，样品很可能不纯，杂质太多
  3.上样量太大，样品发生扩散
  4.你的样品盐浓度太大，致使样品发生扩散
  5.你的电泳条件不适合
  6.你的胶的浓度不适合，可能太大了。
  7.胶凝的不匀