【求助】如何扩增高GC含量的模板?

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【求助】如何扩增高GC含量的模板?
各位高手们注意了,我有个问题想请教大家!
本人之前一直在P富含GC的模板,使用了LA-Taq及其GC Buffer(本身含有DMSO和甘油)和slowdown pcr,都没有将其扩增出来。也重新设计了引物,仍然扩增不出。
我都不知道该怎么办了,哪位高手知道的话,帮忙啊
小弟不甚感激~
注:模板为链霉菌基因组
梯度和Touchdown PCR及热启动PCR都做过
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最新回复

  • bgf5 (2014-10-29 15:14:56)


    不要灰心哦,我的也是这样,只是还没有重新设计引物
    加油啊,总有办法的
    你还没有试增效剂是吧
    可以考虑试一下哦
  • birdfish (2014-10-29 15:15:20)

    不妨直接对GC段含量较高的部分进行序列合成,同时优化密码子,我遇到过你类似的问题,就是这样解决的。
  • whitesheep (2014-10-29 15:15:36)

    看看这篇文章吧,“Universal method Facilitating the Amplification of extremely GC-Rich DNA Frangments from Genomic DNA” Anal. Chem. 2010,82,6303-6307. 我们实验室就用这个方法,还没有扩不出来的。
  • IAM007 (2014-10-29 15:17:12)

    takara的la taq有个专门扩增高gc含量的,呵呵呵,我是扩增7500bp的,我的今天才买的,不知道效果怎么样,反正广告打得蛮好,可以试试看
  • join (2014-10-29 15:17:48)


    请问一下,如果按照那个程序但是不加那个7-deaza-dGTP的话效果怎么样呢
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