【求助】请教大家实时荧光定量PCR出了什么问题

最新回复

• 饭团团 (2014-11-28 21:20:15)

  Ct值整版都没有检测出来。。。

  
  2.jpg

• 饭团团 (2014-11-28 21:20:39)

  溶解曲线。。。。

  
  3.jpg

• 饭团团 (2014-11-28 21:21:29)

  这是肿么个情况啊。。。。请教各位朋友。。。。引物和模板都是好用的啊。。%>_<%

• seagate (2014-11-28 21:21:47)

  是阈值的设置问题吧。

• one (2014-11-28 21:22:55)

  
  从你的溶解曲线看，那个峰不是目的条带的峰，倒像是引物二聚体之类的峰，你的目的基因从头到尾就没有扩增！所以Ct值没有。这个你拿qPCR产物跑个胶就知道结果啦。
  建议你看看是不是你的样品有问题还是样品中不表达你的目的基因！
  

• gogo (2014-11-28 21:23:26)

  从你的CT值、溶解曲线单峰以及扩增曲线看，楼上解释的很清楚。这个位置很可能是引物二聚体而且模板没有有效扩增，可以拿qPCR产物跑琼脂糖电泳的条带与目的产物大小是否一致。另外，你用的是染料还是探针什么型号的PCR仪器，注意看这个染料是不是适合这台real-time仪器。我做qRT-PCR的一般策略是：提RNA，检测RNA完整性和纯度，反转录，模板验证（RT-PCR，用内参验证），引物验证（梯度PCR，找到最适退火温度），qRT-PCR（看溶解曲线、扩增曲线、CT值，数据分析），qRT-PCR产物电泳

• gogo (2014-11-28 21:24:06)

  
  再注意你的阈值设置和反应程序设计跑了多少个循环.

• 饭团团 (2014-11-28 21:24:37)

  QUOTE:

  原帖由 one 于 2014-11-28 21:22 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  从你的溶解曲线看，那个峰不是目的条带的峰，倒像是引物二聚体之类的峰，你的目的基因从头到尾就没有扩增！所以Ct值没有。这个你拿qPCR产物跑个胶就知道结果啦。
  建议你看看是不是你的样品有问题还是样品中不表达你的目的基 ...

  谢谢，我找到原因了，引物配错对了。。。。晕。。。。。