【求助】做PCR出来的条带老是二聚体是怎么回事啊？

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-11-28 21:25 作者: PCR 来源: 分析测试百科网

引物调整了好几次，模板也用的是师兄的模板，应该不会有什么问题，可是扩出来还是二聚体。有没有哪位大神指导指导啊？

yapuyapu (2014-11-28 21:26:04)

引物浓度太高
gogo (2014-11-28 21:38:45)

适当提高模板浓度，降低引物浓度
dreaming (2014-11-28 21:39:04)

提高模板，减少引物也同样问题，怎么办
kewanqi2011 (2014-11-28 22:32:13)

可能引物不好，也可能是引物加的太多，一般50ul体系加1u（10uM）l即可
wanglaoshi (2014-11-28 22:32:35)

可能是退火温度不合适吧，建议用公式算一下：Tm=4（G+C)+2(A+T)。然后用梯度PCR（退火温度为计算温度+或—5至6度）筛选出最佳温度。筛选标准有：看有无引物二聚体出现或与maker比较电泳条带的亮度。
hold住 (2014-11-28 22:33:53)

引物P不出来，各种因素都试验了还不出来，就是引物问题，对吧
hold住 (2014-11-28 22:34:22)

二聚体不就是引物的问题么，当然如果引物浓度高的时候，二聚体更严重，但是最主要原因还是引物设计不好，带来了形成二聚体的风险
ha111 (2014-11-28 22:35:30)

同意6楼，严格意义上来说，二聚体是很难避免的。只是二聚体多少的问题。如果多次调整引物任然只有二聚体的话，建议从PCR反应的循环条件上查找问题。可以试下TD。