【求助】 看看我的PCR跑出来为什么这样的

最新回复

• yjf1026 (2014-11-29 09:51:10)

  给你点建议，
  第一、以后把marker大小写出来，
  第二，设置梯度可以是上下游引物温度的平均值上下5度来这样设置，比如对于你的引物，可以设置为（62+58.5）/2=60.25，即55度到65度，所以说你的梯度设置有问题的
  第三、你的胶可以再跑一下，条带都没有跑开
  第四、有两条条带说明一个问题，你的引物的特异性不好。
  就这样

• tudou85 (2014-11-29 09:51:39)

  谢谢你的建议。我的引物是2000的，曾跑过一次55度的，没出带。至于引物，我正准备重新设计一对。。再次感谢。。

• okhaha (2014-11-29 09:53:52)

  你的条带太多，应该是引物问题，重新设计下引物吧，或者试试提高退火温度（可减少非特异性扩增）

• join (2014-11-29 09:54:14)

  
  确实，把marker跑开点，引物也不好，祝你成功
  

• yjf1026 (2014-11-29 09:54:28)

  
  引物设计有问题

• leifengta (2014-11-29 09:54:55)

  
  看看你的引物  会不会扩增 目的片段里的其它部位  你可以重新设计引物   或者把2条都回收了 然后寄出去测序  挑你需要那段

• 考拉乌拉拉 (2014-11-29 09:55:16)

  
  二楼分析的很有道理。重新设计一下引物吧

• yhz1973 (2014-11-29 09:55:33)

  退火温度低了。可以尝试58℃或更高的温度梯度。如果试过后不出，可以看你扩增的片段是不是困难模板，加增效剂试试。如果还是出两条带，那你还是看看引物的设计是不是有问题，换对引物试试。

• qqq111 (2014-11-29 09:55:58)

  非特异性扩增，引物有问题，不行就用天根的Taq plus得了，高保真酶不怎么好。

• mingming0638 (2014-11-29 09:56:16)

  40个循环如果正常的话跑出的条带应该很亮，出现这种情况原因是多方面的，建议，先不要换引物，先把退火温度设置正确，另一个就是酶，保证他的活性高，以及没有被污染，如果还扩不出来，那就换引物吧！！！
  另一个建议，照片我们一般把点样孔放在上面！！

• daod (2014-11-29 09:56:44)

  
  的确得重新设计，！

• jujuba (2014-11-29 09:56:56)

  
  应该是引物浓度过高，还有胶没跑开，最后，能否把胶摆正了拍？

• hold住 (2014-11-29 09:57:19)

  您好，你问题解决了吗？我也遇到了这样的，怎么解决啊？

• tudou85 (2014-11-29 09:57:36)

  QUOTE:

  原帖由 hold住 于 2014-11-29 09:57 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  您好，你问题解决了吗？我也遇到了这样的，怎么解决啊？

  重新设计了一对引物