【求助】荧光定量PCR溶解曲线Tm跨度宽是怎么回事

最新回复

• feima+ (2014-11-29 14:30:42)

  
  染料法？

• misswu61 (2014-11-29 14:31:03)

  QUOTE:

  原帖由 feima+ 于 2014-11-29 14:30 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  染料法？

  恩是的，我见他们做的好的都是比较窄，Tm跨度很窄……我的这是第二次预实验了，还是这样。罗氏的试剂盒，采用的两步法。

• leifengta (2014-11-29 14:31:31)

  
  第一次看就这么宽的。
  峰的数量代表特异性，峰宽窄代表均一性。

• misswu61 (2014-11-29 14:31:53)

  QUOTE:

  原帖由 leifengta 于 2014-11-29 14:31 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  第一次看就这么宽的。
  峰的数量代表特异性，峰宽窄代表均一性。

  均一性？是怎么个情况？

• leifengta (2014-11-29 14:32:16)

  你怎么设置的溶解曲线程序？

• leifengta (2014-11-29 14:32:33)

  你的TM值是多少？？？

• misswu61 (2014-11-29 14:32:58)

  QUOTE:

  原帖由 leifengta 于 2014-11-29 14:32 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  你怎么设置的溶解曲线程序？

  Hold @ 95°c, 10 min 0 secs       
  Cycling (40 repeats)        Step 1 @ 95°c, hold 15 secs
  Step 2 @ 60°c, hold 60 secs, acquiring to Cycling A(FAM/Sybr)
  Melt (60-95°c) , hold 45 secs on the 1st step, hold 5 secs on next steps, Melt A(FAM/Sybr)

• TNT (2014-11-29 14:33:55)

  我来了 跟你说用热点的更好

• fangxiang (2014-11-29 14:34:18)

  这里面应该有两个不同的产物了吧？都出现了两个TM值！

• misswu61 (2014-11-29 14:34:41)

  QUOTE:

  原帖由 TNT 于 2014-11-29 14:33 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  我来了 跟你说用热点的更好

  用热点？什么意思？求指导……

• misswu61 (2014-11-29 14:36:01)

  QUOTE:

  原帖由 misswu61 于 2014-11-29 14:34 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  用热点？什么意思？求指导……

  我打错了 用热电的产品 叫 Thermo

• baidukk (2014-11-29 14:36:23)

  我也是sybrgreen染料，我仪器里没选sybrgreen，只用了FAM，出来的结果对吗？