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【求助】降落PCR的目的是……
上次pcr没有扩增到目的片段是因为退火温度不对呀!【求助】降落PCR的目的是……
现在我用降落PCR扩增到了目的基因
1、大家看图,觉得我还需要进一步确定最适的准确的退火温度吗?
那样是否必要呢?
甚至我怀疑,有准确的退火温度吗?
2、 我在50-55摄氏度和55-60之间的两次试验都成功了
很奇怪呀
退火温度不是在很窄的范围浮动吗?
3、!!
降落PCR的目的是扩增目的基因 还是寻找适宜的退火温度???
(我的论文不是优化PCR反应条件)
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最新回复
misswu61 (2014-12-01 14:44:37)
touch down 的应用是提高反应的特异性 在需要应用多态性来进行研究的实验中会比较合适
xiaoxiaoniao (2014-12-01 14:45:01)
birdfish (2014-12-01 14:45:23)
有的时候没必要知道确切的退火温度,只要能扩增出目的片段就行。如果是做回收的话,就得知道它的退火温度,并进行优化,已得到最大的浓度
mnstyle (2014-12-01 14:45:37)
mingming0638 (2014-12-01 14:45:56)
目的产物挺亮的,虽然有少量的非特异性产物,但做回收已经足够了。
yueban-1147 (2014-12-01 14:46:12)
降落PCR对PCR仪有要求吗?加样时候有没有要求?看了这个方法我想试试看,哪位秀友能指点一二,小女子不胜感激。。。
66小飞侠 (2014-12-01 14:46:50)
我用降落pcr做的,退火温度比tm低了10度啊啊啊。。。
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