【讨论帖】PCR后琼脂糖电泳成像

最新回复

• S6044 (2014-12-01 14:49:46)

  1、两张图片只是模式不一样，一张是UV模式，另一张是white模式，按理说应该是UV模式，但是white模式下看到的效果感觉似乎好一些。请问这两种模式应该用哪一种呢？
  
  2、从我的电泳图上能看出哪些问题？望高手不吝赐教！谢谢

  
  White.JPG

• huifeng0516 (2014-12-01 14:50:07)

  阴性对照污染了，正常应该什么也跑不出来，应该有阳性对照吧，正常吗？marker太浅了，不知是点少了还是跑得时间太久了。

• xue258 (2014-12-01 14:50:24)

  
  white是什么模式？看着阴性对照有点问题，别的都挺好的

• shenkunjie (2014-12-01 14:50:51)

  
  估计你开WHITE的时候UV也开着吧？WHITE是调胶位置的，单独开应该是看不到条带的。
  

• dragonkilly (2014-12-01 14:51:09)

  
  不知道楼主用什么染的？EB？怎么还弯弯曲曲的呢？是不是电压过大了？三楼说的有道理，阴性对照有带，不管深浅，在我们实验室是不行的……需要重新换水换引物p，在一个maker不清晰，可能胶有点问题
  

• misswu61 (2014-12-01 14:51:31)

  
  marker 跑的不好。你的样品是一种DNA？右边这些怎么参差不齐~

• seagate (2014-12-01 14:51:54)

  是不是电压不稳定导致跑的带弯弯曲曲的，阴性对照有带说明污染了

• 66+77 (2014-12-01 14:52:14)

  你说的阴性对照，是指不应该扩出条带？还是条带大小与阳性不同？如果是前者，这个图说明你的PCR污染了，如果是后者你可根据条带大小判断是否与预期一致。电泳效果不好，刚接触也难免，可以向师兄师姐请教，自己可以慢慢积累经验。

• glass (2014-12-01 14:52:39)

  white模式是白光模式，UV紫外光模式。
  
      开着UV的同时，打开white，有外部的投射光，CCD拍取到的图片对比度会相对高些。

• dodoit (2014-12-01 14:53:05)

  
  感觉胶业有点问题，不如marker不会跑的这么难看……

• wiwi (2014-12-01 14:53:25)

  
  建议升高退火温度，增加引物特异性。也可以采用其它的PCR方式，如热启动PCR，或巢式PCR。
  
  另外，建议使用新配制的电泳缓冲液，因为你的条带跑得很不均匀，说明DNA产生了高级结构。
  

• qhyu (2014-12-01 14:53:48)

  1，琼脂糖凝胶没有做好
  
  2，阴性对照有污染

• 7437654 (2014-12-01 14:54:06)

  应该不是时间太久，在距离胶边缘的还有一小段距离的时候停的，大概也就一个小时多点。电压80V。点样的话，说明书上写着5ul就可以了，我点了7ul呢。

• S6044 (2014-12-01 14:55:00)

  用NAGreen染染的，胶有问题的话 可能是什么问题呢？电泳液也都是24小时内配的。好纠结

• S6044 (2014-12-01 14:55:23)

  没有阳性对照，弄不到啊，呵呵

• pulala (2014-12-01 14:55:50)

  
  阴性对照有污染，胶做得不好，所以跑出来的条带有凹陷。

• yes4 (2014-12-01 14:56:15)

  阴性对照怎么会P出亮带呢，肯定是其他的Mix,或者水被污染了。还有你的Marker看上去上样量很少，可以加大上样量，而且电压不要太大，你可以试一试

• xiaoxiaoniao (2014-12-01 14:56:36)

  阳性对照呢？阴性对照污染了。

• 49888 (2014-12-01 14:56:56)

  
  我也是新手，做了三次pcr产物的电泳，阴性对照总能出现条带，人也换，操作台也换，枪也换了，不知道哪里出了问题。。。纠结。。。