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【求助】引物二聚体怎么会这么亮？

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2015-1-13 10:24    作者: HP007    来源: 分析测试百科网

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【求助】引物二聚体怎么会这么亮？
这是我跑的cox亚基2的，最后两个条带中在近第四条marker处有目的条带，很暗，前面三个都有很明显的非特异性扩增，想请教，这引物二聚体为什么会这么亮？比特异性和非特异性的都亮呢？求解答啊~~~~
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最新回复

  • feima+ (2015-1-13 10:24:41)


    怎么跑出了那么多条带？
    归根结底可能还是引物不行吧

  • rxcc33 (2015-1-13 10:25:04)

    最大的问题是你的引物设计的不行！你可以在NCBI上把引物BLAST一下！看看你引物怎么样？

  • yjf1026 (2015-1-13 10:25:29)

    可以用DNAstar检查下引物二聚体等情况

  • pou (2015-1-13 10:26:10)


    引物量大吧，减少用量试试，另外，你的模板也要确保无误。

  • chuntian1983 (2015-1-13 10:26:25)

    引物设计的不好吧！

  • 3N4G (2015-1-13 10:26:45)

    先做个单引物验证试试

  • wiwi (2015-1-13 10:27:04)


    引物和模板都有问题，你可以先把模板用宽梳子跑电泳将目的已经回收纯化后，在重新用引物扩增看看  如果还不行就重新设计引物了。

  • ALALA (2015-1-13 10:27:27)

    引物的量多了，你看，其实你有目的条带

  • fangxiang (2015-1-13 10:28:50)


    做个单引物检测，可能单引物会出现你的非目的条带。

  • rxcc33 (2015-1-13 10:30:18)


    引物二聚体的出现太多，说明你的扩增效率不高，也就是说很多引物没有被用来参与PCR的扩增，尤其是目的片段少的情况下，更能用此解释。你可以检查一下你的扩增产物是不是很多。

  • dodoit (2015-1-13 10:30:39)


    可以试下二次pcr

  • yueban-1147 (2015-1-13 10:30:56)


    这种情况是存在的，可以再提高退火温度，增加循环数试试，祝你好运

  • mamamiya (2015-1-13 10:31:15)

    重复了没？特异性不是太好，可以调整下引物。

  • join (2015-1-13 10:34:31)

    先做个单引物验证试试

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    单引物验证时指只加上引物或者下引物然后不出现条带，证明是引物二聚体吗？

  • yyaxw84 (2015-1-13 10:35:00)


    引物呀
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