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• rxcc33 (2015-1-13 11:38:41)

  扩增体系有污染，可能是水、Buffer、dntp或引物

• 966735obeng (2015-1-13 11:39:09)

  QUOTE:

  原帖由 rxcc33 于 2015-1-13 11:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  扩增体系有污染，可能是水、Buffer、dntp或引物

  我也是这样怀疑，引物新的，水、Buffer、dntp也换了，可是结果还这样啊，难道是引物设计的问题？可是在基因组上引物的结合位点是特异的呀。

• 小游abc (2015-1-13 11:39:36)

  
  升高温度

• eric930 (2015-1-13 11:40:39)

  可能是引物的问题 会不会是你的目的条带中央有引物结合位点 我以前也遇到这样的情况 就是中段有总是扩出小条带
  但是还要注意如果跟别人混用试剂也很麻烦不知道会出现什么结果
  

• 9妖9 (2015-1-13 11:41:05)

  我也是这样怀疑，引物新的，水、Buffer、dntp也换了，可是结果还这样啊，难道是引物设计的问题？可是在基 ...
  
  ========================================
  
  那就可能是PCR的事。难不成能形成很大的引物二聚体？

• tianmei001 (2015-1-13 11:41:22)

  特异性不够好或者是污染
  特异性问题可以靠改变引物，改变温度和巢式PCR来解决
  体系的污染除了你提到的那些以外，酶也是可能被污染的，不妨也检查下
  

• panda王 (2015-1-13 11:41:39)

  
  关于用水也能扩出条带的问题，我个人建议你到别的实验室借枪用一下，看看还能不能扩出来了。其他的那些污染基本都不可能，只有枪在多次吸打液体尤其是PCR扩增产物用枪洗打之后很容易有一部分气溶胶存在于枪里。
  我曾经为这事非常头疼，后来发现是枪的问题。

• ritou1985 (2015-1-13 11:41:57)

  
  问题是水的同样也出了，那就说明水或者能够接触水的你使用的东西有问题啊，条带的大小不对那就得看你的引物和模版了。
  但是从一二对照来说，条带准确；单从2图来看，也只是多出了水对应的那个条带，但是一号明显更浓，说明一号的污染源最多，但是这个污染源是从何而来，就得在分析了，但是应该不是水里来，因为要是在水里，只能一样；可是从一图来看，有可能是水里的。
  那么就有一个设想，你的模版或者溶解模版的溶液，或者你的枪头污染
  这只是样一样二是同一个东西来说，哎，还是自己一个一个的排除吧，把pcr所需的所有元素，每次只变一个元素，确保变的这个安全，最后找出答案。模版也得算上
  

• vvmmoy (2015-1-13 11:42:31)

  换进口的PCR管，戴口罩再试一次。你这个是明显的污染。

• gogo (2015-1-13 11:44:35)

  重新设计引物吧

• 966735obeng (2015-1-13 11:44:58)

  
  谢谢大家，我把体系中的东东都换新的了，虽然还能扩到750bp的带，但明显黯淡多了，回收后可以后续实验了。

• pou (2015-1-13 11:45:15)

  
  污染