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【求助】PCR胶回收
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发表于: 2015-2-13 16:42 作者: dior 来源: 分析测试百科网
查看完整版本请点击这里:
【求助】PCR胶回收
各位高手,新手想问pcr产物量达到 什么程度才能回收,并进行TA克隆、连接转化、质粒提取、测序等后续工作啊。请求帮助阿。帮我看看我设计的简并引物PCR后的胶图,是否可以进行胶回收以及后续工作啊。
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【求助】PCR胶回收
我也来说两句
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最新回复
purrr
(2015-2-13 16:43:24)
和markerb比较一下就行
wiwi
(2015-2-13 16:43:51)
你的目的条带是最下边的么 胶回收这个没什么硬性的要求 只要你觉得可以就行 能看清楚 没有其他杂带即可
chengjie79
(2015-2-13 16:44:18)
跑的好虚,回收只要和Marker比较就行
宁小胡
(2015-2-13 16:44:41)
你上多少样啊?
mercedes
(2015-2-13 16:45:12)
片段多了后面的连接,酶切才好做,尽量提高片段的量,EB染色至少能够看到明显的条带,胶回收也不是100%回收的,效率取决于片段的大小,量,用的回收柱子
boom
(2015-2-13 16:45:48)
条带有些浅吧 看着marker也不亮 即使有非特异 自己切胶一下就行了
jujuba
(2015-2-13 16:46:07)
这样回收的话可能效果不是很好,建议你上样量再增大一些重新跑电泳,然后再回收。
tewank
(2015-2-13 16:46:31)
跟Marker对比一下,看看亮度是它的几倍,可以根据Marker浓度估算产物浓度,适当调低曝光率有助于对比。不过如楼上所说,这个亮度实在是太低了,可以适当增加几次循环,或者略微提高点引物量,效果应该会好一些。
bangqi_k
(2015-2-13 16:46:55)
把体系扩大点吧
lorri
(2015-2-13 16:47:26)
把体系扩大点吧
wanglaoshi
(2015-2-13 16:47:57)
看图来说太少了吧。
吉吉0120
(2015-2-13 16:48:40)
简单的就是直接割胶不用回收捣碎直接TA克隆也可以的,我经常这样做就是懒省事。
11_hjx
(2015-2-13 16:49:02)
简单的就是直接割胶不用回收捣碎直接TA克隆也可以的
草木叉
(2015-2-13 16:49:36)
有三条带比较亮,回收的时候给它浓缩一下,然后根据自己以前做的经验调好质粒和产物的比例。依我们实验室平常做的结果来看,这些应该够连的~
sunbent
(2015-2-13 16:50:05)
你先回收一下,测一下浓度,我回收后测浓度200ng/ul 后面的连接转化也都能做 效果一般
zhenxin
(2015-2-13 16:50:31)
做大体系,然后把胶做的厚一些,点样全点进去,注意 细节 步骤
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【求助】PCR胶回收
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purrr (2015-2-13 16:43:24)
wiwi (2015-2-13 16:43:51)
chengjie79 (2015-2-13 16:44:18)
跑的好虚,回收只要和Marker比较就行
宁小胡 (2015-2-13 16:44:41)
你上多少样啊?
mercedes (2015-2-13 16:45:12)
片段多了后面的连接,酶切才好做,尽量提高片段的量,EB染色至少能够看到明显的条带,胶回收也不是100%回收的,效率取决于片段的大小,量,用的回收柱子
boom (2015-2-13 16:45:48)
条带有些浅吧 看着marker也不亮 即使有非特异 自己切胶一下就行了
jujuba (2015-2-13 16:46:07)
tewank (2015-2-13 16:46:31)
跟Marker对比一下,看看亮度是它的几倍,可以根据Marker浓度估算产物浓度,适当调低曝光率有助于对比。不过如楼上所说,这个亮度实在是太低了,可以适当增加几次循环,或者略微提高点引物量,效果应该会好一些。
bangqi_k (2015-2-13 16:46:55)
lorri (2015-2-13 16:47:26)
wanglaoshi (2015-2-13 16:47:57)
看图来说太少了吧。
吉吉0120 (2015-2-13 16:48:40)
11_hjx (2015-2-13 16:49:02)
草木叉 (2015-2-13 16:49:36)
有三条带比较亮,回收的时候给它浓缩一下,然后根据自己以前做的经验调好质粒和产物的比例。依我们实验室平常做的结果来看,这些应该够连的~
sunbent (2015-2-13 16:50:05)
你先回收一下,测一下浓度,我回收后测浓度200ng/ul 后面的连接转化也都能做 效果一般
zhenxin (2015-2-13 16:50:31)
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