【求助】定量PCR扩增效率如此之低怎么办啊？

最新回复

• yes4 (2015-3-10 17:15:33)

  
  保证设计的引物没问题
  优化反应体系

• coolcool (2015-3-10 17:15:49)

  从哪些方面优化啊，我都试验了好多次了，找不到头绪

• feiya (2015-3-10 17:16:05)

  
  这不是普通PCR，基本够了，这样的话只能是扩出条带，不能保证在最佳效率，
  整体设计没有问题的情况下，引物浓度，镁离子浓度，酶的用量，DNTP用量，等方面，保证发挥最佳效率，
  此外还要看看模板里有没有抑制剂的成分
  

• coolcool (2015-3-10 17:16:22)

  镁离子浓度，酶的用量，DNTP用量是试剂盒里配好了的，引物也通过加样量的变化试了调了下总体浓度，效果不明显。我的模板是用试剂盒提取的质粒，没有加什么有机溶剂一类的，实在是不知道所以然了

• wood533 (2015-3-10 17:16:37)

  实验时切记避免SYBR反复冻融，我的实验曾今受过这个影响~~~~

• memory (2015-3-10 17:16:53)

  
  引物有问题

• coolcool (2015-3-10 17:17:15)

  谢谢啦，的确是我的引物有问题，换了个其他的引物扩增效率高了好多，引物的设计及储存时间都会有影响呢
  

• qhyu (2015-3-10 17:17:36)

  
  我也出现这个问题！你是怎么解决的啊？求教下！

• kewanqi2011 (2015-3-10 17:17:53)

  
  楼主是重新设计的引物还是用新稀释的啊？我也遇到了这个问题，也有人说提高温度就好

• remonte (2015-3-10 17:18:09)

  重新设计引物，定量PCR遇到的问题可见cuturl('http://www.bio-taobao.com/dz/thread-346-1-1.html') 。