【求助】请大家帮忙看看怎样来优化pcr体系

最新回复

• one (2015-3-11 16:24:01)

  
  有没有试过加BSA或者提高退火温度
  或者进行2次PCR，得到的条带应该会比较纯

• 轰轰 (2015-3-11 16:24:17)

  或者是加一点DMSO，非特异的带就少很多》

• eor (2015-3-11 16:24:33)

  
  体系虽然加倍，但并不是所有的试剂加倍就行，引物没必要加倍，不然二聚体现象会严重。模版浓度是多少？
  

• lgm (2015-3-11 16:24:50)

  减少引物和模板量，提高退火温度，要是用Taq酶在退火温度为52以上时加入1.35微升每十微升体系会更好  KOD酶就不用加了   一般胶回收的话用KOD做比较好  保真性高

• yapuyapu (2015-3-11 16:25:07)

  直接切胶回收就可以呀，杂带没有影响的

• jingling845 (2015-3-11 16:25:22)

  
  降低体系中的Mg离子浓度

• 土壤 (2015-3-11 16:25:54)

  学习学习！
  来个巢式PCR吧！

• TAT (2015-3-11 16:26:10)

  
  用spss做个多因素的正交设计，全面优化条件

• daod (2015-3-11 16:26:29)

  适当的减少引物的浓度，稍微提高退火温度试试

• 66小飞侠 (2015-3-11 16:26:45)

  条带很亮 没问题 直接回收就行

• 66小飞侠 (2015-3-11 16:27:03)

  或者是加一点DMSO，非特异的带就少很多》
  
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  DMSO可以起什么作用   量要加多少

• ququer787 (2015-3-11 16:27:22)

  那你就做10ul体系的呗，做5个相同的，也不是50ul吗，再说了，就算50ul的，你切胶薄点切，杂带不影响吗，你的最下面也有带，你说是引物二具体，切胶更切不到那个地方了

• kuaizige (2015-3-11 16:27:37)

  你的目的条带多大？如果是1kb  ，把延伸时间改为30S，降低循环数为30个，引物终浓度为10uM就可以了   ；
  如果是1.5kb ，那就把延伸时间改为1min30s，循环数30，引物终浓度为10uM；
  做一次试试看
  DMSO的加入是特异性更强，终浓度为4-6%的样子就可以了

• duoduo (2015-3-11 16:27:59)

  有没有试过加BSA或者提高退火温度
  或者进行2次PCR，得到的条带应该会比较纯
  
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  请问一下，BSA或DMSO在25微升体系中大概加多少量？谢谢

• PCR (2015-3-11 16:28:21)

  QUOTE:

  原帖由 duoduo 于 2015-3-11 16:27 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  有没有试过加BSA或者提高退火温度
  或者进行2次PCR，得到的条带应该会比较纯
  
  ==============================================
  
  请问一下，BSA或DMSO在25微升体系中大概加多少量？谢谢 ...

  我一般加BSA，我加的BSA的量跟引物的量一样。DMSO要自己摸索，不同的量对PCR的扩增有不同的作用。