【求助】PCR条带弥散的问题

最新回复

• yizhi (2015-4-01 15:07:00)

  
  1、引物特异性不好
  2、某一引物加多了，上下游引物的量要一样，实在不行就保持一个引物浓度不变，另外一个引物做个梯度
  3、引物发生了降解

• 小螺号 (2015-4-01 15:07:23)

  1.有弥散退火温度还要摸下
  2.有非特异性条带那就是引物的特异性不够好

• 黄花菜 (2015-4-01 15:07:51)

  
  1.质粒的浓度一般都很高，作为模版要稀释的。
  2.引物浓度的问题

• 气泡 (2015-4-01 15:08:08)

  酶，模版，引物的浓度高都会引起，可以减低试试。
  marker也有弥散，是不是DNA胶有问题……

• 了了 (2015-4-01 15:08:27)

  
  减低引物量，小幅度提高退货温度，缩短循环数！

• 一叶 (2015-4-01 15:08:45)

  对，明显有非特异性扩增，提高退火温度，减少循环次数

• 大尾巴 (2015-4-01 15:09:11)

  同意对质粒做梯度稀释

• 牙牙 (2015-4-01 15:09:32)

  是引物特异性不好，要减低引物量！

• PCR (2015-4-01 15:10:24)

  谢谢大家，问题已经解决
  降低了循环数，其他反应条件都没有变

• c86v (2015-4-01 15:10:43)

  非目的性DNA 片段多了就会引起弥散吧，所有能减弱这种原因的措施都可以尝试。。。