【求助】请高手给分析一下拖带，非特异性的原因

最新回复

• 荒漠孤驴 (2015-4-02 20:28:16)

  引物设计的特异性不高吧

• nikonun (2015-4-02 20:28:37)

  
  （1）引物设计不合理，特异性不好，有选择的话就重新设计；
  （2）如果没得选择你就适当提高退火温度，可以增加扩增特异性；
  （3）你把你的胶浓度稍微提高点，你Marker的40、60bp的也有些拖带
  （4）降落PCR可以增加产量和特异性
  希望对你有帮助

• greenbee (2015-4-02 20:28:55)

  
  可以先做一个梯度PCR，选择好合适的退火温度。
  

• utt0989 (2015-4-02 20:29:11)

  
  我觉得你可以如3楼所说的提高下胶的浓度看看

• lgm (2015-4-02 20:29:40)

  
  引物特异性不好。
  退火温度过高。

• PCR (2015-4-02 20:30:21)

  
  呵呵，过低。

• 雪原 (2015-4-02 20:30:53)

  
  如果是做RACE，那条带就应该都切，如是普通pcr，应该去降低退火温度，适当的降低模板的加入量

• nikonun (2015-4-02 20:31:09)

  
  首先我觉得这不是胶的问题；出现这种现象的原因很多的！你在试着摸索一下，但是前提是你要确保你的模板是好的！
  

• 3N4G (2015-4-02 20:31:27)

  
  引物的问题 也可能是退火温度不对 你这个80%是引物不够特异了

• avi317 (2015-4-02 20:32:00)

  
  你可以尝试一下巢式PCR

• tianmei001 (2015-4-02 20:32:23)

  
  减少循环数或者循环的时间，希望能降低非特异性的扩增