【讨论帖】 求分析

最新回复

• remonte (2015-4-02 20:39:56)

  
  用PCR得到的产物做模板继续PCR，也就是二次PCR 就能得到量大的目的条带了。

• veiwu (2015-4-02 20:40:11)

  
  94-59-94?
  延伸温度是94？什么酶？

• 邀月 (2015-4-02 20:41:32)

  QUOTE:

  原帖由 remonte 于 2015-4-2 20:39 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  用PCR得到的产物做模板继续PCR，也就是二次PCR 就能得到量大的目的条带了。

  继续做PCR是指？我刚开始做 不知道 是指你们说的回收么？能详细点告诉我么 谢谢了啊

• 邀月 (2015-4-02 20:42:25)

  哦哦 说错了，是72 不好意思

• 爬呀爬 (2015-4-02 20:42:44)

  
  加循环

• 爬呀爬 (2015-4-02 20:43:06)

  继续做PCR是指？我刚开始做 不知道 是指你们说的回收么？能详细点告诉我么 谢谢了啊
  
  ========================================
  
  二次PCR就是用上次PCR的产物做模板，再次PCR

• veiwu (2015-4-02 20:43:22)

  
  挖胶回收有试剂盒。可以参考试剂盒说明书做。

• duoduo (2015-4-02 20:43:41)

  
  回收后的产物作为模板再进行PCR。ＰＣＲ反应可以增至35个循环。

• 脱水萝卜 (2015-4-02 20:44:02)

  
  可以提高退火温度，减少杂带的产生！二次pcr很容易发生突变的！

• kulee (2015-4-02 20:44:36)

  
  增加循环数，减少延伸时间

• jingling845 (2015-4-02 20:44:51)

  
  检查前面DNA提取质量……

• nikonun (2015-4-02 20:45:08)

  
  产物多大？延伸时间多长？用的什么酶？缩短延伸时间吧
  

• 我佛慈悲 (2015-4-02 20:45:27)

  
  增加循环次数，或者做巢式均可，建议增加循环

• HPLC使者 (2015-4-02 20:45:44)

  
  提高退火温度！  建议不要用PCR产物 用相同的引物进行2次扩增，只能得到更弥散的带
  

• tie8 (2015-4-02 20:46:02)

  
  提高退火温度，循环数可以增加一点。你的引物特异性应该不是很好，不行的话可以换一对引物试试
  

• 邀月 (2015-4-02 20:46:34)

  产物多大？延伸时间多长？用的什么酶？缩短延伸时间吧
  
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  产物是第二条 从上到下，延伸时间为30秒  用的rTaq

• 阳光树 (2015-4-02 20:47:23)

  产物是第二条 从上到下，延伸时间为30秒  用的rTaq
  
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  延伸时间再缩短一些通常可以抑制长片段的非特异性扩增的产生。另外，如其他人所说的，你也可以增加循环次数，提高退火温度。都是新手呢，我的意见仅供参考，大家交流交流。