【求助】请教PCR 结果问题分析

最新回复

• HOT兔 (2015-4-28 16:59:58)

  由于上次实验没有条带，为了分析没有条带的原因 我这次用了三个样品：1）以前做过的HT29 RNA 2) 上次没有条带的SW620 RNA 3） 和1同一次提取的RNA 已经合成了CDNA。 结果如图2.

  
  2011-12-07 ht29 gapdh.jpg

• HOT兔 (2015-4-28 19:19:47)

  
  我需要的条带是从上到下的 第二条

• www.1 (2015-4-28 19:20:18)

  第一个条带是不是你的模板呢？模板加多了吗？

• yizhi (2015-4-28 19:20:52)

  
  你的退火温度可能太低，二聚体较多；引物特异性应该不是很强，把非目的条带也扩出来了。如果你是需要目的条带做后续试验，直接把胶割下来回收就行了，第一条带不用管，或者换一对引物试试。

• feiya (2015-4-28 19:21:20)

  
  可能原因：1.引物的特异性不够，2.退火温度过低。
  可以尝试：1.重新合成引物，2适当提高退火温度。
  不过楼主还是扩增除了想要的条带，如果有后续试验，可以对目的条带进行回收，不用管非特异性条带!
  

• dior (2015-4-28 19:21:51)

  
  退火温度依次递减 会不会好一些呢

• langlang (2015-4-28 19:22:25)

  提高退火温度。要不把目的条带回收回来做模板再重新PCR。

• S6044 (2015-4-28 19:22:43)

  引物特异性不好

• HOT兔 (2015-4-28 19:23:17)

  QUOTE:

  原帖由 yizhi 于 2015-4-28 19:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  你的退火温度可能太低，二聚体较多；引物特异性应该不是很强，把非目的条带也扩出来了。如果你是需要目的条带做后续试验，直接把胶割下来回收就行了，第一条带不用管，或者换一对引物试试。 ...

  换了引物做了一下 结果挺好的 呵呵 谢谢