【求助】细胞RNA的提取

最新回复

• bgf5 (2015-6-02 15:23:05)

  ２、小滴管吹打，使细胞完全裂解，然后完全转移至1.5ml EP管内。

  
  62400077.snap.jpg

• bgf5 (2015-6-02 15:23:22)

  
  3、加入0.2ml的氯仿，剧烈震荡混匀30s。有人喜欢室温静置10min，有人直接去离心也没问题。偶愿意室温静置10min，看自动分层了，上层水相，下层为酚相。

  
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• bgf5 (2015-6-02 15:27:52)

  
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  4、4度离心，15000rpm，15min，看看中间白的是蛋白层，上层为水相。（最上有点红，那是反射光，呵呵 TongueTongue）

  
  10236469.snap.jpg

• bgf5 (2015-6-02 15:28:38)

  
  5、将上层水相移至另一EP管内，400-500ul，不要贪多，小心切勿吸到蛋白，加入等量的异丙醇，充分混匀，室温静置10min。然后4度，15000rpm，离心10min，然后管底可以看到RNA噢！看看图，我加了个圈。

  
  40963081.jpg

• bgf5 (2015-6-02 15:29:00)

  
  6、弃掉上清，加入冰冷的75%乙醇漂洗两次，用移液器将液体吸干，室温干燥10-20分钟，待产物呈半透明状，加入20ul DEPC处理过的水溶解RNA，你就可以用了。图就不贴了。
  提RNA所用试验物品均需经0.1%DEPC水处理后消毒、烤干。所需试剂如75%乙醇需用无水乙醇加灭菌的DEPC水配制，为保证RNA提取过程中，RNA不被空气中RNA酶降解，应勤换手套，戴口罩，这是常识哦。SmileTongue
  祝你好运。

• eor (2015-6-02 15:29:53)

  用移液器将液体吸干，室温干燥10-20分钟，待产物呈半透明状，加入20ul DEPC处理过的水溶解RNA，你就可以用了
  
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  补充一点：移液器将液体吸干后，干燥时间一般10分钟左右即可，干燥时间过长会导致RNA很难溶解。
  另：如davidbgb战友所提取的RNA量，最好加入10～20ul RNase Free 水（DEPC处理过的水，也可用高压处理过的双蒸水），以免RNA浓度过低，影响以后的扩增效率。
  

• dior (2015-6-02 15:30:10)

  相关疾病：
  请教一下 ，如果我要提取脑组织海马区的RNA，方法和上面的一样吗，我要做脑缺血后脑组织蛋白的RT-PCR，谢谢楼上，能指教一下吗。

• dior (2015-6-02 15:31:14)

  相关疾病：
  请教一下 ，如果我要提取脑组织海马区的RNA，方法和上面的一样吗，我要做脑缺血后脑组织蛋白的RT-PCR，谢谢楼上，能指教一下吗。

• dog002 (2015-6-02 15:53:56)

  我一直在克隆一个基因
  提RNA
  DNA酶消化
  RT－PCR
  P内参
  P基因
  可是几个月过去了，我还是没有P出来，我的RNA提的很好，内参也P出来了，就是自己的基因P不出来，引物是文献上的别人都P出来的。
  很郁闷！

• dior (2015-6-02 16:19:01)

  我一直在克隆一个基因
  提RNA
  DNA酶消化
  RT－PCR
  P内参
  P基因
  可是几个月过去了，我还是没有P出来，我的RNA提的很好，内参也P出来了，就是自己的基因P不出来，引物是文献上的别人都P出来的。
  很郁闷！
  ......
  
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  文献上的引物要到Genebank上核对一下。加油啊！祝你试验顺利！

• am10 (2015-6-02 16:26:33)

  
  谢谢！请教：如果提取的RNA不想马上做其他实验，怎么保存？若能不吝赐教，万分感谢！

• dog002 (2015-6-02 16:41:59)

  QUOTE:

  原帖由 am10 于 2015-6-2 16:26 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  谢谢！请教：如果提取的RNA不想马上做其他实验，怎么保存？若能不吝赐教，万分感谢！

  建议-70度冻存，但是时间也不能太久，也会降解的。

• am10 (2015-6-02 16:42:21)

  
  为什么提取后RNA 电泳就跑不好呢？总是一条很亮的带，只有一条

• feiya (2015-6-02 16:42:40)

  
  一直在找这么视觉效果的RNA提取，正中我怀，谢谢谢谢哈，哈哈哈！

• dior (2015-6-02 16:43:28)

  您好，我想问一下，您使用的瓶子是多大的？加入的Trizol是多少？？？

• shenkunjie (2015-6-02 16:44:34)

  用trizol提取RNA时，加氯仿离心后是分三层吗？最上层水相，中间蛋白，下层trizol混合液？

• dog002 (2015-6-02 16:44:54)

  想知道如果实验要求提取ＲＮＡ，但加入Ｔｒｉｚｏｌ将细胞裂解液收集后移入１.５ｍｌEp管中可以直接-20℃保存吗？过三两天再提取RNA，这样行么？

• 131415 (2015-6-02 16:45:14)

  楼主大好人！楼主直接在培养瓶中加入Trizol？这样细胞量怎么控制？

• 131415 (2015-6-02 16:45:53)

  我的实验是把胶原膜和细胞一起培养，请问加入Trizol 是否会溶解胶原膜从而影响结果呢？万分感激

• qhyu (2015-6-02 16:47:00)

  
  我提RNA时，第一步用PBS洗，PBS没有吸尽，就加了TRIZOL，再提RNA有影响吗