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求助:荧光定量pcr的结果分析 [转自 丁香园论坛]
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近期做荧光pcr,机器型号:ABI7000
设计:
①实验组cDNA+目的基因引物②实验组cDNA+管家基因actin
③对照组cDNA+目的基因引物④对照组cDNA+管家基因actin
3孔重复
反应体系25ul:sybr green 1 12.5ul
引物 0.5ul 【浓度10um/ul】
50*rox 0.5ul
cDNA 1.5ul 【20ul体系一步法合成cDNA,然后稀释5倍,取1.5ul】
灭菌三蒸水 10ul
循环温度,时间及次数: 95°c 1:00
95°c 00:15
60°c 1:00 40cycle
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最新回复
王六六 (2011-8-23 10:53:14)
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王六六 (2011-8-23 10:53:58)
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王六六 (2011-8-23 10:54:40)
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明天的明天 (2011-8-23 10:55:29)
建议:
提取RNA时候最好用DNase I消化去除gDNA。
cDNA可以不稀释作为模板。
再试试,看能不能解决。
王六六 (2011-8-23 10:56:07)
我在提rna的时候确实没有用DNAase。
因为是刚进实验室没多久,首次操作,pcr仪器也是借用别个实验室的,当时赶时间,估计有个孔搞错了。
继续改进ing
小蜜蜂 (2011-8-23 10:56:48)
小蜜蜂 (2011-8-23 10:56:48)
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