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【求助】利用实时定量PCR和2－△△CT法分析基因相对表达量
【求助】利用实时定量PCR和2－△△CT法分析基因相对表达量
我刚刚接触实时定量pcr，想问一个很肤浅的关于用2－△△CT法分析基因相对表达量的问题。
举例：实验分组：对照组（n=6），实验组（n=6），要比较TGF mRNA表达情况。
是不是对照组的2-△△CT值都是1，而实验组的2-△△CT值都是1的倍数。
比如：对照组2-△△CT值分别是： 1 1 1 1 1 1
实验组2-△△CT值分别是：2.1 2.3 1.8 2.8 1.5 3.0
然后再用两个样本的t检验比较有无统计学差异？
还有一个问题就是：如果上述这样理解是对的，那么对照组2-△△CT值都是1，是不是不能反应对照组个体之间的差异？
谢谢大家的帮助！
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【求助】利用实时定量PCR和2－△△CT法分析基因相对表达量
最新回复
babybabe (2015-8-31 11:26:43)
vivian4123 (2015-8-31 11:32:52)
QUOTE:
我最近在做类似的实验，2-△△CT到底是怎么算呢，我还是很明白，请指教一下！dior (2015-8-31 14:54:53)
要懂相对定量，就需要先明白为什么要检测内参基因？为什么只检测靶基因不行？明白以后再看看标准曲线法的相对定量怎么算的，然后再由标准曲线法相对定量的问题看看2-△△CT如果解决的，接下来看看扩增效率修正法相对定量怎么回事怎么用。
最后几种相对定量方法各有优缺点。
介绍相对定量的多了去，但是大多数脑子里一团浆糊，所以再怎么说也是捣浆糊。高手有，忙。
toy (2015-8-31 14:55:31)
对照组不可能全是1的，参照公式
84300950.jpg
wood533 (2015-8-31 15:14:05)
好像现在2－△△CT法用的都不多了，比较粗略，没有标准曲线法好
wood533 (2015-8-31 15:15:08)
QUOTE:
对照组应该都是1 啊！因为计算对照组的时候，减号前面与后面部分相等。即：上述公式计算出来的值为“0”！计算2的零次方，应为1 啊！okhaha (2015-8-31 15:15:47)
是啊 ，自己搞懂了也不说一下。不过我的理解和lz一样，对照组都是1.我看了一篇文章也是这样做，不过当然反映不出对照组内不同基因的表达差异
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