【求助】蛋白纯化求助

最新回复

• dior (2015-9-07 10:54:27)

  
  大肠裂解液直接用除菌过滤是不合适的。不知规模是多大？小规模建议高速离心，大规模建议切向流微滤，没必要用到DNA酶增加杂质。

• H2O (2015-9-07 10:54:46)

  
  量还是比较大的，所以离心过滤仪器成本太高了，现在在用切向流微滤，但是感觉DNA线性堵塞膜孔，蛋白过不去。。想是不是需要用DNA酶把DNA切小一点？

• www.1 (2015-9-07 10:55:14)

  
  超声将DNA打碎

• shenkunjie (2015-9-07 10:55:31)

  
  你多大量？我当时发过一批500L的大肠，都是用的那种筒式离心机，很好用的，完事下来就可以直接上柱子了。

• nn255 (2015-9-07 10:55:49)

  
  堵膜孔的原因很多，你确定是DNA？
  其实在微观上，膜带有电荷，很多带电荷的东西都可能fouling膜。蛋白质aggregate本身说不定也能堵膜，要避免变性。

• am10 (2015-9-07 10:56:10)

  
  相关疾病：
  先天性卵巢发育不全综合征
  
  先用0.45um的滤膜过滤后再上柱子

• kewanqi2011 (2015-9-07 10:56:29)

  
  我们做的最大的是300L的一般都是离心后过柱子的

• shkudo (2015-9-07 10:57:34)

  
  破碎的时候可以考虑加一些DNA酶，国外不少工艺也是这么做的，尤其是胞内表达的蛋白，DNA释放很多。

• IAM007 (2015-9-07 10:57:56)

  我们使用PEI沉淀核酸，再用硫酸安把蛋白沉淀去除PEI。

• remonte (2015-9-07 10:58:13)

  使用深层过滤器啊，深层过滤器很适合做澄清的工作，而且对去除DNA有很好的效果，容污能力也比较强。

• caihong (2015-9-07 10:58:31)

  
  先离心，再做，效果很好的

• KGZ564 (2015-9-07 10:58:48)

  
  可以盐析后离心收取蛋白在进行纯化我以前遇到过你的情况可以和我联系

• ero11 (2015-9-07 11:00:01)

  
  首先，你要弄清楚堵膜的到底是不是DNA，建议堵住之后水淋洗一下，然后再生回来，再生液测DNA残留，与超滤前对比，结果就可以发现到底是什么东西堵膜了。
  然后，如果是DNA，如果你的蛋白耐热性好，考虑加热变性，加热能沉淀掉一部分DNA，同时也降低料液的粘稠度。
  如果不是DNA，那最大的可能就是宿主蛋白或者目的蛋白的聚集体了，同样的热变性能解决一定问题。
  如果你的蛋白热不耐受，可以考虑加入一些絮凝剂等（尽量与目的蛋白在分子量以及化学性质上差别大，以便于后续分离），也可以考虑用活性炭等大孔进行吸附过滤。
  基本能解决你的问题。

• woshi (2015-9-07 11:00:17)

  一般用匀浆机可以打碎的，如果还有可以用离心机离心就可以了

• vcve (2015-9-07 11:00:38)

  
  细胞破碎之后都是要进行离心，然后进行纯化的