【求助】大肠杆菌表达重组蛋白

字体: 小中大 | 打印发表于: 2015-9-09 11:50 作者: 荷塘青蛙！来源: 分析测试百科网

大肠杆菌表达胸腺素六串体，工程菌已构建好，复苏扩增的时候，SDS-PAGE可确认目的蛋白的表达，但是一进行大规模的培养（上发酵罐）----80L，就发现蛋白表达几乎是为零，请问各位大师问题会出在哪里？

iii_ii (2015-9-09 11:51:06)

给你推荐个“笨”方法：复苏扩增时显示有表达，说明菌株没问题，但是放大后不表达（终点？），可以通过扩大过程中分步收集留样检测，来判断哪个过程出现了丢失。一般的可能性是工程菌株不稳定。
feiya (2015-9-09 11:51:26)

发酵过程补料对表达影响很大，如果有诱导剂，诱导剂的加入时间也决定表达量的多少？
shkudo (2015-9-09 11:51:45)

同意楼上，一般先用摇瓶和小罐进行发酵条件优化，最后放大到大规模发酵。
nn255 (2015-9-09 11:52:07)

你构建出来，跑了SDS看有产品就没有进行小试的研究吗？
shkudo (2015-9-09 11:52:24)

朋友，小试没有经过中试放大慢慢摸索就想一步到位么？
ero11 (2015-9-09 11:54:08)

上面都很专业啊，确实要进行各种优化的
iii_ii (2015-9-09 11:54:26)

需要进行摇瓶和10L发酵罐的小试，直接上80L？