【求助】做realtime PCR，分4个时间段处理，...

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• yonger (2015-10-07 14:52:39)

  
  严格地说，每个时间点都必须有untreated sample，然后normalized to untreated 。
  你如果没有设立，只能以0小时的作为untreated，然后进行normalization。

• ROSE李 (2015-10-07 14:53:08)

  谢谢了 ，小弟想问问如果是实验组4个时间点，2-△△ct怎么计算最后的终值呢，可不可以以0小时的对照组为参考计算呢，我想看看四个时间点有无统计学差异！

  
  95317963.jpg

• yonger (2015-10-07 14:53:35)

  我知道你的意思。我认为你的每个时间点都应该设置一个未处理组。然后每个时间点，都根据本时间点的未处理组计算ddCt。然后用one-way ANOVA分析得到的4个ddCt，以考察4个时间点之间有无统计学差异。

• ROSE李 (2015-10-07 14:53:57)

  QUOTE:

  原帖由 yonger 于 2015-10-7 14:53 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  我知道你的意思。我认为你的每个时间点都应该设置一个未处理组。然后每个时间点，都根据本时间点的未处理组计算ddCt。然后用one-way ANOVA分析得到的4个ddCt，以考察4个时间点之间有无统计学差异。 ...

  恩 太感谢了，最后one-way ANOVA分析是比较2-ΔΔCt还是ΔΔCt，对照组的2-ΔΔCt结果都是1，比较ΔΔCt吗？然后实验组比较2-ΔΔCt？感觉2-ΔΔCt是不是就是把ΔΔCt放大一点啊？这几天都被这些事情搞晕了！

• yonger (2015-10-07 14:54:17)

  
  将实验组和对照组进行分析，得到2^-ΔΔCt。然后用方差分析，比较4个时间点之间的2^-ΔΔCt差异。
  看看这篇文章 （ cuturl('http://d.dxy.cn/detail/1186299') ）内的实例分析，就清楚了。

• whitesheep (2015-10-07 14:58:07)

  QUOTE:

  原帖由 yonger 于 2015-10-7 14:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  严格地说，每个时间点都必须有untreated sample，然后normalized to untreated 。
  你如果没有设立，只能以0小时的作为untreated，然后进行normalization。

  我想问下，我现在想测A基因在细胞加药24h,96h后与0h的表达差异情况：
  做定量的时候已经确定各基因扩增效率是可以用2-△△CT 处理，数据格式如下，实验目的是看加药前（day0）对比加药后（day1和day4）基因表达变化.
  我想问问DAY1和DAY4未加药的数据要怎么处理呢？用什么统计方法？SD要怎么得出呢？
  
         
  目的平均CT值
  内参平均CT值
  △CT=目的平均CT值-内参平均CT值
  △△CT
  Day0（未处理）
  A0
  B0
  P0=A0-B0
  Day1（处理)
  C0
  D0
  R0=C0-D0
  R0-P0
  Day1（未处理）
  E0
  F0
  Day4（处理)
  G0
  H0
  T0=G0-H0
  H0-P0
  Day4（未处理）
  X0
  Y0