【求助】关于real time PCR的数据处理

最新回复

• summerxx (2015-10-09 10:28:19)

  是呀，恳请各位高手指点一下呀。我非常想知道绝对定量的统计处理方法。现在手头的收据一大堆，很是着急呀。

• PCR (2015-10-09 10:28:37)

  
  慢慢来，最慢就是最快，多看类似REAL TIME 的参考文献，他山之石，可以攻玉，您
  就会时时心生智慧。GOOD LUCKY TO YOU。
  MANY THANKS,BEAUTY LIFE WITH BEAUTY HEART ;GOOD PERSON WITH BEST DREAM.
  Please email:cgca2002@163.com
  BEST REGARDS,
  CGC NEARTU

• xiaoxiaoniao (2015-10-09 10:28:53)

  
  “用确定拷贝数的稀释的标准品进行反应，作出标准曲线。将待测样品反应结束后，获得反应的Ct值，代入标准曲线，求得拷贝数。”了解的也就这么多，不知道对你有没有用？

• PCR (2015-10-09 10:29:13)

  
  I SEE ,
  MANY THANKS
  CGC NEARTU

• xyw5 (2015-10-09 10:30:01)

  荧光定量PCR结果分析：
  荧光染料SYBR® Green I结合双链DNA后，可被激发出荧光，荧光强度与双链DNA的量成正比，PCR反应扩增cDNA，随着循环次数增多，cDNA产物也越来越多，激发出的荧光就越强，荧光强度增加到可被检测出时所需要的PCR循环次数即为循环阈值（CT），CT出现于PCR反应指数增长期，它与样本中模板分子的起始数量成反比，即样本的起始拷贝数越多，则在PCR反应时使荧光强度达到被检测出的水平所需要的时间越少，需要的循环次数也越少，CT越小，而起始拷贝数越少，则CT越大。
  处理组样本基因的数量用相对定量的方法来表示，即先用参照基因β-actin的数量进行标准化，然后和对照组样本基因进行比较。具体方法是：先分别获得样本基因和参照基因CT的平均值即均值CT，用处理组样本基因的均值CT减去处理组参照基因的均值CT，得到ΔCT（1），即ΔCT（1）＝（处理组样本基因均值CT-处理组参照基因均值CT），；同样，用对照组样本基因的均值CT减去对照组参照基因的均值CT，得到ΔCT（2），即ΔCT（2）＝（对照组样本基因均值CT-对照组参照基因均值CT），然后用ΔCT（1）减去ΔCT（2），得到ΔΔCT，即ΔΔCT＝ΔCT（1）-ΔCT（2） 最终，处理组样本基因相对于对照组样本基因的量通过公式2-（ΔΔCT）计算得到。

• xuuuu (2015-10-09 10:30:19)

  你说的这种方法有文献支持吗?因为我就是用你说的这种方法做相对定量的,最后做的拄形图都向下,因为我的目的基因表达量比看家基因少,CT值相减是负的.期待着你的回音!!

• gogo (2015-10-09 10:30:37)

  这个相对定量的计算方法有文献支持的，在Methods杂志上有介绍的。但是，结果肯定是大于零的。虽然“目的基因表达量比看家基因少”，与结果是没关系的。如果你的目的基因表达是上升的趋势，结果大于1；反之，则结果大于零小于1。绝对不会出现负数，因为最后求的是2的幂，没有小于零的可能。

• 131415 (2015-10-09 10:31:54)

  
  也就是说，在同一时间点的比较可以用上述公式（4个数据）。
  请教大家，如何分析处理组及对照组随时相的改变呢？
  简单点，引入时间因素，某处理方式下一定时间，比较两个时间点间某基因的表达水平（8个数据）？该用那个公式？
  Time1: taget gene CT 处理 CT 对照
  Actin CT 处理 CT 对照
  Time2: taget gene CT 处理 CT 对照
  Actin CT 处理 CT 对照

• vvmmoy (2015-10-09 10:32:13)

  
  要求解释绝对定量的结果统计方法