【求助】6孔板每孔要接种多少细胞才会长成单层细胞？

最新回复

• xuuuu (2015-10-15 11:52:19)

  
  1-2.5 million

• summerxx (2015-10-15 11:55:00)

  
  首先要看细胞的大小。
  一般要几十万，10的5次方以上。
  当你铺上去，需要留一定的空间给细胞生长。细胞需要两至三天的生长时间才能长满传代。

• seagate (2015-10-15 11:55:15)

  
  一般需要2－4＊１０000个细胞的说

• summerxx (2015-10-15 11:55:31)

  
  如果是原代培养,应在10的6次方以上,若是传代,10的5次方到6次方

• jude (2015-10-15 11:55:48)

  
  那就是说是十万个细胞？这么多阿？我是用来提RNA的，Hep3B。这样好像也太多了吧。

• summerxx (2015-10-15 11:56:09)

  
  要記得細胞接種密度太低會長得很差啊~
  這細胞你自己應該養過吧?
  你應當把平常慣用的培養密度照按照面積的比例去計算,
  就會知道六孔板該養多少細胞了.

• whitesheep (2015-10-15 11:56:29)

  
  如果是提取RNA用的话，我们的经验是：
  细胞数在1-5×10 7是最佳的。通常不要小于10的6次方，否则RNA的量会偏低，不利于下面试验步骤的进行。
  而在实际操作中，往往是细胞在培养板中长到90％以上后 就基本就可以达到这个要求了。

• summerxx (2015-10-15 11:58:18)

  
  六孔板每孔长满后 细胞大约为2×106左右
  你可以根据细胞的生长速度 细胞大小
  干预因素对细胞生长的影响 以及加干预因素后所需的干预时间
  来决定铺板的密度 六孔板对于RNA抽提来说 细胞量是足够的
  我们实验室一直如此
  如 司马 战友所讲 如用invitrogen的trizol方法细胞量 在100－10000时也是可用的
  但是对小量RNA抽提 5×106比较理想 可参阅说明书
  当然 不怕浪费也可以用100mm的dish 在处理因素比较廉价时可以考虑

• PINK (2015-10-15 11:58:33)

  这与接种所用的血清的含量也有关系的。如果你用2-5%的维持培养基的话，应该接种稍微多点，因为这时候细胞不在增殖或增殖很少。如果你还用正常的10%的培养基，则细胞数应该少点。
  还与你铺板后的培养时间有关系。继续培养12小时还是24小时？
  我们的做法：
  10%FCS，1乘10的6次方，晚上接种，过夜（约12h）。

• xiaoxiaoniao (2015-10-15 11:58:49)

  视细胞而定：
  CPE生成实验中
  生长较慢的2BS是30万／孔
  生长较快的Vero是15万／孔
  以上为6孔板，约三天长满种毒的经验值
  欢迎交流～

• jude (2015-10-15 11:59:10)

  
  我一般用的是5％的血清，
  做96孔板我比较有经验，6孔板我是第一次做，
  96孔板接种3B细胞我一般都是5000个/孔，24小时后就可以加药了。
  换算我实在是不会，因为我查到的资料不知道是指一个孔的底面积还是指整块板的总的底面积。
  还请各位继续帮忙

• sunnyB (2015-10-15 11:59:30)

  相关疾病：
  先天性卵巢发育不全综合征
  
  培养面积是指孔的底面积，因为只有细胞培养板的孔底上才长细胞HaHa～
  拿尺子量一量96孔板和6孔板孔的直径，按圆面积即可算得96孔板和6孔板细胞的大概接种比例，要是我没记错，96孔板的孔直径是0.75cm,培养面积是0.45cm2～
  剩下的还是要靠实际接种细胞摸索，算好了96孔板和6孔板细胞的接种比例告诉我们谢谢～