查看完整版本请点击这里:
【求助】扫描电镜不知是不是细胞
我最近用脱钙骨基质支架材料体外培养骨髓基质干细胞细胞,做了扫描电镜不知是不是细胞?请大家看看是什么地方出现了问题?【求助】扫描电镜不知是不是细胞
细胞培养步骤:
1:脱钙骨基质75%酒精浸泡过夜;PBS清洗5min *3次;完全培养基浸泡过夜;
2: 骨髓基质干细胞1*106/ML密度接种,每个接种100微升
3:培养箱中静置4小时
4:加入完全培养基1ml,继续培养4天
扫描电镜步骤:
1:取出支架,PBS冲洗
2: 3.5%戊二醛固定4小时
3: 30%、60%、70%、80%、90%、100%叔丁醇梯度脱水,每个梯度10分钟。
4: 真空干燥,置样,喷金,扫描
查看完整版本请点击这里:
【求助】扫描电镜不知是不是细胞
【求助】扫描电镜不知是不是细胞
44385620.snap.jpg
74091373.snap.jpg
最新回复
efp (2015-12-15 14:48:11)
请大家看看是什么地方出现了问题?
jishiben (2015-12-15 14:48:50)
跳跳哈里 (2015-12-15 14:49:24)
自己分析结果:
1:如果脱钙骨基质上是细胞,可能问题出在固定或脱水环节;其中脱水步骤中叔丁醇脱水时间是不是恰当(每个梯度10分钟)?梯度叔丁醇配方是否正确(比如70%叔丁醇配方为:70体积叔丁醇,30体积纯水; 但是有的文献上说是70体积叔丁醇,30体积酒精)?
2:如果脱钙骨基质上不是细胞,那么支架上的絮状物可能是叔丁醇的结晶物?细胞在支架上不生长,可能的问题还是出在支架材料上,可能还有毒性残留。
大花猫bb (2015-12-15 14:51:03)
小熊妮妮 (2015-12-15 14:51:38)
yuanyuan (2015-12-15 14:52:24)
2、用2%的戊二醛固定15min,固定温度:4℃
3、0.1mol/L的pbs清洗三次、每次5-10min
4、1%的锇酸固定1h,固定温度:4℃
5、0.1mol/L的pbs清洗三次、每次5-10min
6、梯度乙醇脱水,每次5min(30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%,100&的脱两次)
7、干燥。最合适的干燥方法是“临界点干燥”,但是一般环境中没有“临界点干燥仪”。其他的有真空冷冻干燥、真空干燥、自然空气干燥等。
再就是喷金 扫描了。
【求助】扫描电镜不知是不是细胞