【求助】RT-PCR和Realtime-PCR

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• 65urh (2016-2-09 21:21:24)

  听您的语气您应该是位长者 我想和您说不是每个学生都像您想的那样能够扎实的掌握一些实验的基础知识

• tewank (2016-2-09 21:21:47)

  你的基本概念不清楚，没法回答你。
  先回去好好看看书，搞清楚什么是“RT-PCR”，什么是“Real time-PCR”。
  哪个学校的学生？老师有责任啊。

• 伊莎贝拉 (2016-2-09 21:22:10)

  
  我试着解释下，不对，请赐教。
  RT-PCR：reverese transcription PCR, 逆转录PCR，为什么要逆转录呢，我们要看一个基因表达不表达，表达多少，得从mRNA来分析，所以我们先提RNA，在做逆转录PCR，得到cDNA，该cDNA与基因的序列是一致，再用cDNA做实时荧光定量PCR（real time PCR)或者普通PCR来分析该基因的表达情况，结合内参基因及对照，如果该基因的mRNA多，那么cDNA也就多，那么real time PCR起峰就越快，则说明该基因表达量高。或者说该基因表达升高，则mRNA变多，cDNA也变多，real time PCR起峰就越快。
  Real time PCR: 举人禽流感H5N1的real time PCR检测为例，人禽流感的基因正常情况不存在于人体基因组中，用血提出人的基因组DNA，如果感染H5N1了,可以通过Real time PCR检测到是否有禽流感的基因的存在，没有感染，则检测不到该基因，CT值至少在35个以上。real time PCR如果用DNA做模板，就是看有没有该基因，用cDNA模板，就是看该基因表达有多少。（都要有对照哦，跟对照相比）
  不知道解释的对不对，希望不要死命被拍砖哦，请各位多多包涵。
  “看某一个传导通路是否在基因水平上影响某蛋白的表达是不是只做RT-PCR就可以了呢”，这句话说的就有问题。

• seagate (2016-2-09 21:22:36)

  QUOTE:

  原帖由 tewank 于 2016-2-9 21:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  你的基本概念不清楚，没法回答你。
  先回去好好看看书，搞清楚什么是“RT-PCR”，什么是“Real time-PCR”。
  哪个学校的学生？老师有责任啊。

  很讨厌这种语气说话的人， 什么叫基本概念？谁规定的是基本概念？对有些人是基本概念对另外一些人不见得是基本概念。 谁说大学里就一定要教？我打赌有些大学里就没有教。请问丁香园有规定哪些问题不可以问吗？ 再说任何问题都是可以讨论的，即使是基本概念也是可以讨论的，哪怕是“什么叫细胞？ 什么叫DNA？”都是可以讨论的，因为你不问就永远不知道别人怎么说，就永远不知道别人的看法。在你回答别人问题的时候，也同时在巩固和提高你自己，因为有些问题你可能平时没有仔细想过，别人问了刚好也帮你总结。搞科研本来就有先有后，犯不着因为自己多干了几年就一副教育部长的口气，还问哪个学校的，难道还要向其学校通报不成？把一个轻松开放的论坛搞得充满白色恐怖气氛！

• tewank (2016-2-09 21:22:58)

  QUOTE:

  原帖由 seagate 于 2016-2-9 21:22 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  很讨厌这种语气说话的人， 什么叫基本概念？谁规定的是基本概念？对有些人是基本概念对另外一些人不见得是基本概念。 谁说大学里就一定要教？我打赌有些大学里就没有教。请问丁香园有规定哪些问题不可以问吗？ 再说任何问题都 ...

  我的本意是共勉，没有教训任何人的意思。因为我本身基础知识也不扎实，为此而遭受了一次至今在心里还留有创伤的一次经历。我研究生时候的老师对我说，基本理论知识不扎实，就不会有可持续发展；这就像泉水和池塘里的水一样，只有井水才不怕干旱；只有扎实的理论知识，结合阅读前沿文献，才会碰撞出思想的火花。

• tewank (2016-2-09 21:23:16)

  QUOTE:

  原帖由 ROSE李 于 2016-2-9 21:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  本人刚接触实验有一事不明，RT-PCR和Realtime-PCR这两种方法分别在什么情况下选择呢？比如我想看某一个传导通路是否在基因水平上影响某蛋白的表达是不是只做RT-PCR就可以了呢。谢谢各位大侠 ...

  百度一下不就出来了吗？⊙﹏⊙b汗

• tewank (2016-2-09 21:23:33)

  我没有讽刺你的意思。
  你研究的内容是”看某一个传导通路是否在基因水平上影响某蛋白的表达“，由此可以判断你应该是本科三四年级的学生，或者硕士研究生的起步阶段。
  无论处于上面哪两种情况，无论是生物相关学科的本科生，还是临床相关学科的本科生，至少在三年级以前，在基础课教材里面就应该掌握了这些基本知识

• ROSE李 (2016-2-09 21:24:15)

  听您的语气您应该是位长者 我想和您说不是每个学生都像您想的那样能够扎实的掌握一些实验的基础知识 即使是研究生读完也会有一大批学生没做过实验 也许像您所在的那种好学校才会让学生在三年级以前就掌握RT-PCR的事儿
  那么谁又能保证过个两三年还能记忆犹新呢
  如果您没有生气那是最好的了 如果因为我的某些话影响了您对我们这些孩子们的看法 您就太片面了 也许我是只菜鸟 也许我的态度不好 但并不代表全部 也不代表您的学生吧

• eric930 (2016-2-09 21:25:08)

  QUOTE:

  原帖由 tewank 于 2016-2-9 21:22 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  我的本意是共勉，没有教训任何人的意思。因为我本身基础知识也不扎实，为此而遭受了一次至今在心里还留有创伤的一次经历。我研究生时候的老师对我说，基本理论知识不扎实，就不会有可持续发展；这就像泉水和池塘里的水一样，只 ...

  很赞同，基本理论知识确实应该打牢，不然总是浮在表面，很难做深入的研究!

• milkdog (2016-2-09 21:25:25)

  
  RT-PCR：逆转录PCR,目的是为了获得cDNA
  Realtime-PCR：实时PCR，目的一般为了检测一个基因在各组织中的含量
  每个人都会有不懂的，当年我刚进实验室的时候连pCR都不懂，慢慢来

• PCR (2016-2-09 21:25:52)

  RT-PCR全称又叫reverse transcription PCR 所以这样看来，RT指的就是普通的逆转PCR

• 乌贼老弟 (2016-2-09 21:26:28)

  说下啊 不知道对不对，有权威的请指导。
  起峰的高低跟模板的浓度时程反比的，与基因的表达丰度也是成反比的。
  比如说相同的基因不同的浓度，浓度越高起峰就越早。
  相同的浓度不同的基因，表达丰度越高起峰就越早。
  而且起峰的早晚还和很多因数有关系，比如体系的阻碍物、基线的调整、背景荧光信号的高低等等决定的。

• dreaming (2016-2-09 21:28:21)

  只能说良药苦口了。但楼主也需要明白，不是每一个人都很有耐心来一一解释的。毕竟来这里回贴的都是付出居多。另外，既然都问到信号通路、表达情况了，那对于RTPCR，real time,之类的概念还真的是基本概念。如果基本概念不知道，确实应该先弄懂。即使没规定大学必须要教，但自己也必须去自学吧，因为这些真的是很基本的概念问题。另外，很多东西不是必须要去‘问’才能知道的，做为一个大学生，成年人，难道连基本的搜索也不会用吗？所以你说的‘因为你不问就永远不知道别人怎么说，就永远不知道别人的看法。’，是很怪的想法。当然，楼上欺负新人，真是不应该，这下子把新人给吓到了。

• sunbent (2016-2-09 21:29:00)

  QUOTE:

  原帖由 dreaming 于 2016-2-9 21:28 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  只能说良药苦口了。但楼主也需要明白，不是每一个人都很有耐心来一一解释的。毕竟来这里回贴的都是付出居多。另外，既然都问到信号通路、表达情况了，那对于RTPCR，real time,之类的概念还真的是基本概念。如果基本概念不知 ...

  不是说必须让你耐心解释，如果你觉得这个问题简单，如果你觉得这是基本概念，你可以置之不理。你不愿意回答，自然有人愿意回答。这个论坛各种层次的人都有，实在不清楚什么才叫高水平的问题，是不是必须正高以上才能发帖讨论？RT-PCR是一种实验技术，信号通路表达生物学理论，知道信号通路而不了解RTPCR也是很自然的事，我想这样的人也大有人在，我甚至怀疑您也是或者曾经也是其中一员。
  自学是应该的，但您怎么知道人家没自学？ 搜索也是应该的，但您怎么知道人家没搜索？ 为什么一定要假设别人都是没有自学、没有搜索？ 有很多问题，光看书是会觉得很抽象，就是要听听别人怎么说才更容易理解。有时候书上讲一大段你都不懂，但别人一句话你就豁然开朗，所谓抛砖引玉，我要是不问，当然就不知道是不是会得到形象生动的回答。我不觉得这是“很怪”的想法。

• standbyme (2016-2-09 21:29:42)

  
  很正常。我本科读的那学校就不知道。我才进实验室也不知道。我先声明下，免得也被问了。我本科是川北医学院的，成绩一般。生化老师是陈华绪。当年生化83分，但是我读完本科也不清楚楼主问的内容。估计是学校太差了吧。惭愧，没法和高手共语啊。

• wanglaoshi (2016-2-09 21:30:15)

  
  我临床工作12年，今年写了篇论文，讲到RT-PCR，以及realtime RT-PCR，被审稿专家质疑： 到底用的是realtime RT-PCR 还是rRt-PCR。我很纳闷难道RT-PCR就不能实时吗？所以在丁香园中搜索，搜到这份帖子。我们临床文章中谈到检测方法的时候都是一笔带过的，反正病例是确诊的，不会特别去了解两者的差别。说真的不懂，即使以前学过，也还给老师了。没有实践的知识不是自己的知识。声援楼主。
  我个人也是这么觉得，别人求助了，知道的给个答案，不知道的，就不要回答好了。知道的人，能用通俗的方法让非专业的人也一看就明白，本身也是一种本事。