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【讨论帖】PCR电泳结果初步定量分析
前几天一直想找一个好的pcr条带定量分析软件，但是结果不是不好用就是软件分析的结果感觉差别大，其中试过bandscan5，但是出来的结果不是很好。【讨论帖】PCR电泳结果初步定量分析
于是想到了ipp，ipp可以定量分析组化的照片，而且结果比较可靠，但是pcr的电泳图片是黑白的，如果用ipp分析，结果是与实际相反的，条带亮的数值小，而条带暗的数值大，（因为它是分析的目标区域的吸光度值，当然条带暗吸光度值就会大，这些数值本身是正确的）。但我想得到这样一个结果：电泳条带亮的得出的数值大，条带暗的得出的数值小，如果用常规的ipp分析，结果只能是适得其反。本人通过几天摸索，联合应用photoshop和ipp初步得出的一个期待的结果，分享给大家。
步骤：
1.选择要处理的电泳照片。
2.在photoshop里打开，然后在图像里选择反相，将照片的黑白反过来并保存。
3.在ipp里打开反相后的照片，选择IOD为分析手段分析各条带累计光密度值：这是由于背景是白条带是黑，得出的数值就会是条带“亮”数值大，条带“暗”数值小。
如果想分析目标分子处理前后表达的变化，就可以连同内参的条带一起分析，得出数据后送入excel,用相应的条带除以各自对应的内参数值，最后比较两个比值就可以知道表达是增高还是降低。
以上是本人初步摸索的，仅供各位参考，也希望大伙提供更好的建议和方法。
谢谢！
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最新回复
zhenxin (2016-2-09 22:40:25)
viviwang1987 (2016-2-09 22:40:41)
楼主在吗，我要做了定量PCR，做转基因的表达量。
11_hjx (2016-2-09 22:40:58)
shanzhapia696 (2016-2-09 22:41:25)
LZ，ipp自身就可作反相处理的，点击一下反相即可完成。
8s5g (2016-2-09 22:41:56)
我今天用了下Quantity One 感觉比band scan好用 band scan我一加新的band 软件就死掉了。。。
orangecake (2016-2-09 22:42:14)
我马上也做这个，我也试一下这个定量的方法
redbutterfly (2016-2-09 22:42:37)
楼上的想法是好的，但是目前WB国外杂志一般只认化学发光，DAB染色一般不接受的，所以最好用化学发光。
memory (2016-2-09 22:42:54)
不错哈 楼主确实花了心思与功夫 我一般也只是和Marker比较亮度估计浓度 请教楼主 你说的这个定量主要可以用于哪些实验的结果分析？ 谢谢了！
黄花菜 (2016-2-09 22:43:19)
同意，我也觉得反向比较容易分析。
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