【求助】利用Real time PCR检测miRNA

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【求助】利用Real time PCR检测miRNA
目前正在准备做肿瘤mature miRNA分离,利用real time PCR检测工作。
mature RNA片断很小(~22nt),RT primer文献上介绍使用stem-loop primer,请问一下哪位战友看到过具体的stem-loop primer结构呢?
Ambion公司给的资料又是语焉不详,真是郁闷啊。
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最新回复

  • ending (2016-2-29 14:28:47)


    买他们公司的引物试剂盒吧,但是我又没有查到用这个试剂盒发表的文献,唉,确实不好办!
  • tie8 (2016-2-29 14:29:06)


    本来想直接给你答案的,不过搜一下可以获得更多收获.
    上pubmed搜吧,有几篇全文里有茎环的序列
  • wood533 (2016-2-29 14:29:31)


    文章发表在nucleic acid research上,有两种方法,Ambion的是SYBR green法,ABI是Taqman-MGB法,对应的文章有两三篇,很容易找到,并且NAR的文章是全免费浏览的。在文章的补充材料中有详细的序列介绍,尤其是Taqman法,提供了近200种miRNA的检测用序列。具体文章来源可看下贴:
    cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=5918266&sty=1&tpg=1&age=0')
  • langlang (2016-2-29 14:29:56)

    谢谢大家
    看了很多的关于Taqman的引物设计方案
    但是由于各种原因,我们最终选择了使用sybrgreen
    实验正在进行中
  • memory (2016-2-29 14:30:13)


    结果不理想,溶解曲线特异性不好
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