【求助】请问怎样才能去掉这最后进样的溶液中的蛋白

请教园子里诸位高手,我用有机相提取血浆中药物后,挥干有机相,再用100ul流动相溶解进样,但最后的溶液有点浑浊,并且进几针后柱压明显升高,请问怎样才能去掉这最后进样的溶液中的蛋白?我曾用一万转每分离心五分钟,但沉淀效果不明显。
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  • xgy412 (2016-4-12 10:09:41)

    首先觉得复溶后的浑浊不一定是蛋白,可能是某些成分在流动相中溶解度差而析出的沉淀,蛋白也有可能。
    方法:1.复溶后样品0.2um微孔滤膜过滤,然后进样;
    2.复溶后样品超滤离心管离心超滤,滤过液进样;
    3.血浆样品采用固相萃取小柱处理;
    4.加预柱,柱压高后更换柱芯。

    很头痛的问题,体内药物分析常遇到,仅供参考。
  • mimima (2016-4-12 10:10:00)

    还有几种可能:
    1、离心管不够干净;
    2、离心分层后,在转移有机相时操作不仔细,可能将蛋白带出(不知道你是用什么溶剂提取的?);
    3、样品在流动相中的溶解不好,挥干后用甲醇或乙腈溶解。
  • hcy517 (2016-4-12 10:10:22)

    我用过两种方法,效果都很好,你试试。
    1、先加入100ul的流动相溶解,然后再加入50ul的正己烷,涡旋混匀,然后再高速离心,下层即为你所要的澄清进样液。
    2、加入乙腈来沉淀蛋白,这种方法上层清夜为进样液。
    上面两种方法都能取得较好的效果,但是用乙腈得到的澄清液更多,我个人推荐用乙腈来沉淀。
  • hcy517 (2016-4-12 10:10:52)

    沉淀蛋白方法很多,但我不知对血浆样品任何?
    1 PbOAC
    2 ZnOAc
    3 高氯酸
  • 8899 (2016-4-12 10:11:11)

    我用过高氯酸,效果还可以,我个人认为你的问题不在于除蛋白,很有可能是样品的溶解差,你看看你的样品的理化性质,楼上各位说的方法都可以用,你可以取一点纯品用流动相溶解看看(或代谢产物)。