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HCP抗体制备很少有免疫老鼠制备抗体的。cygnus试剂盒及abcam公司中的HCP抗体是羊多抗或兔多抗,这样的好处很明显,一次制备量可以够用几年甚至上十年,也避免不同制备批次间的差异。如后期工艺稳定,考虑工艺特异性,可另外再制备工艺特异性抗体,适合申报注册等。工艺特异抗原的制备,就是空白菌经过相同的发酵及纯化条件处理后所得,当然,纯化至哪一步,这个就得具体问题,具体分析了,不建议到最后一步,虽然针对性会更强,但不能保证不会缺失部分HCP,建议层析一步或两步,目的蛋白纯度达到一定要求就可以了。
HCP制备中免疫原性差异的问题是难以避免的,abcam公司针对大肠低分子量HCP的抗体,货号为ab181642,大家可以了解下。
对了,关于专属性验证问题,我们这里只考察了基质的影响。其实,houjinglhy 所说的也不错,可找其他相关蛋白验证,如你是CHO HCP试剂盒,是不是可以检测大肠或酵母的HCP,看是否存在交叉反应?